Немембранные органоиды клетки: описание, строение, функции
Клетки животных, растений и грибов состоят из трех основных частей: плазматической мембраны, ядра и цитоплазмы. Бактерии отличаются от них тем, что не обладают ядром, однако они также имеют мембрану и цитоплазму.
Как устроена цитоплазма?
Это внутренняя часть клетки, в которой можно выделить гиалоплазму (жидкую среду), включения и органоиды (органеллы). Включения — это непостоянные образования в клетке, которые в основном представляют собой капли или кристаллы запасных питательных веществ. Органоиды — это постоянные структуры. Как в организме главными функциональными единицами являются органы, так в клетке все основные функции выполняют органеллы.
Мембранные и немембранные органоиды клетки
Первые делятся на одномембранные и двумембранные. Последних только два — это митохондрии и хлоропласты. К одномембранным относятся лизосомы, комплекс Гольджи, эндоплазматическая сеть (эндоплазматический ретикулум), вакуоли. О немембранных органоидах мы поговорим подробнее в этой статье.
Органоиды клетки немембранного строения
К ним относятся рибосомы, клеточный центр, а также цитоскелет, сформированный микротрубочками и микрофиламентами. Также к данной группе можно причислить органоиды движения, которыми обладают одноклеточные организмы, а также мужские половые клетки животных. Давайте рассмотрим по порядку немембранные органоиды клетки, их строение и функции.
Что такое рибосомы?
Это немембранные органоиды клетки, которые состоят из рибонуклеопротеинов. В их строение входит две части (субъединицы). Одна из них малая, одна — большая. В спокойном состоянии они находятся раздельно. Соединяются они тогда, когда рибосома начинает функционировать.
Отвечают эти немембранные органоиды клетки за синтез белков. А именно за процесс трансляции — соединение аминокислот в полипептидную цепочку в определенном порядке, информация о котором скопирована с ДНК и записана на иРНК.
Размер рибосом составляет двадцать нанометров. Количество этих органоидов в клетке может достигать до нескольких десятков тысяч штук.
У эукариот рибосомы находятся как в гиалоплазме, так и на поверхности шероховатого эндоплазматического ретикулума. Также они присутствуют внутри двумембранных органоидов: митохондрий и хлоропластов.
Клеточный центр
Этот органоид состоит из центросомы, которая окружена центросферой. Центросома представлена двумя центриолями — пустыми внутри цилиндрами, состоящими из микротрубочек. Центросфера состоит из отходящих от клеточного центра радиально микротрубочек. Также в ее состав входят промежуточные филаменты и микрофибриллы.
Клеточный центр выполняет такие функции как образование веретена деления. Также он является центром организации микротрубочек.
Что касается химического строения данного органоида, то основным веществом является белок тубулин.
Этот органоид находится в геометрическом центре клетки, поэтому он и имеет такое название.
Микрофиламенты и микротрубочки
Первые представляют собой нити из белка актина. Их диаметр составляет 6 нанометров.
Диаметр микротрубочек составляет 24 нанометра. Их стенки построены из белка тубулина.
Эти немембранные органоиды клетки образуют цитоскелет, который помогает поддерживать постоянную форму.
Еще одна функция микротрубочек — транспортная, по ним могут перемещаться органоиды и вещества в клетке.
Органоиды передвижения
Они бывают двух видов: реснички и жгутики.
Первыми обладают такие одноклеточные организмы, как инфузории-туфельки.
Жгутики есть у хламидомонад, а также у сперматозоидов животных.
Органоиды передвижения состоят из сократительных белков.
Заключение
В качестве вывода приводим обобщенную информацию.
Органоид | Расположение в клетке | Строение | Функции |
Рибосомы | Свободно плавают в гиалоплазме, а также находятся на внешней стороне стенок шероховатого эндоплазматического ретикулума | Состоят из малой и большой частей. Химический состав — рибонуклеопротеины. | Синтез белка |
Клеточный центр | Геометрический центр клетки | Два центриоли (цилиндры из микротрубочек) и центросфера — радиально отходящие микротрубочки. | Формирование веретена деления, организация микротрубочек |
Микрофиламенты | В цитоплазме клетки | Тонкие нити из сократительного белка актина | Создание опоры, иногда — обеспечение движения (например, у амеб) |
Микротрубочки | В цитоплазме | Полые трубки из тубулина | Создание опоры, транспорт элементов клетки |
Реснички и жгутики | С внешней стороны плазматической мембраны | Состоят из белков | Передвижение одноклеточного организма в пространстве |
Вот мы и рассмотрели все немембранные органоиды растений, животных, грибов и бактерий, их строение и функции.
Страница не найдена
Страница не найдена.
День народного единства – праздник молодой. Впервые в России его отметили 4 ноября 2005 года. Но история его начинается намного раньше – много веков назад.
Праздник берет начало из событий XVII века, когда Москву завоевали польские интервенты. Попытка собрать народное ополчение не удалась – помешала междоусобица. В сентябре 1611 года в Нижнем Новгороде земский староста Кузьма Минин обратился к людям с призывом собрать средства и помочь освободить страну. На пост главного воеводы был приглашен новгородский князь Дмитрий Пожарский. Собрались люди из разных сословий и народностей.
С чудотворной иконой Казанской Божией Матери ополчение сумело 4 ноября 1612 года взять штурмом Китай-город и изгнать поляков из Москвы. На престол вошли первые Романовы, а икона стала предметом особого почитания.
Поэтому считается, что День народного единства — это воскрешённый государственный праздник. Он был учреждён в 1649 году указом царя Алексея Михайловича как церковный праздник Казанской иконы Божией Матери. Но с приходом к власти большевиков его упразднили, традиция отмечать освобождение Москвы прервалась.
Праздник Дня народного единства был вновь учрежден правительством России в 2004 году, впервые отметили его 4 ноября 2005 года. День народного единства символизирует не саму победу над поляками, а сплочение народа, благодаря которому и удалось прогнать их из столицы.
Уважаемые обучающиеся, родители (законные представители), коллеги!
Предлагаем Вам познакомиться с Проектом «Памятные даты военной истории Отечества». Это совместный Проект Российского военно — исторического общества и Российского организационного комитета «Победа»
Памятные даты военной истории России. Ноябрь.
В период нерабочих дней с 01.11.20221 по 03.11.2021 в группах дошкольного образования в соответствии с приказом Управления образования от 27.10.2021 № 982 будут функционировать три дежурных группы для детей, чьи родители (законные представители) будут работать.Родители(законные представители), чьи дети нуждаются в посещении дежурных групп, должны написать заявление и предоставить копию распорядительного документа работодателя о работе в этот период.
Дежурные группы — первая младшая, вторая младшая и средняя.
29 ноября был проведен общешкольный видео урок, посвящённый Дню народного единства, в котором приняли участие около 800 учащихся. Организацию и подготовку мероприятия провели активисты школьного музея.
Кроме этого 17 учащихся 3-9 классов школы приняли участие во всероссийской акции Российского движения школьников, 13 учащихся 1-х классов провели игру «Золотые ворота» в рамках Всероссийской научно-практической конференции «Поликультурное и этнокультурное образование: достижение стратегических ориентиров».
А учащиеся 8-10 классов впервые проявили себя во всероссийской акции «Квиз ProЕдинство». Увлекательные мероприятия, проведённые педагогом Голосовой Юлией Александровной, вызвали большой интерес у учащихся и способствовали формированию чувства гордости за прошлое и настоящие России, сплочённости многонационального сообщества.
В октябре в Томской области стартовала конференция, посвященная присвоению городу Томску почётного звания Российской Федерации «Город трудовой доблести», 76-й годовщине Победы в Великой Отечественной войне 1941-1945 годов. 27 октября 2021 года в онлайн-формате прошёл четвёртый этап, к которому подключились 35 обучающихся и педагогов из Колпашевского, Молчановского, Чаинского районов. Школьники представили жюри 18 исследовательских работ на трех секциях: «Трудовая доблесть томичей в годы Великой Отечественной войны», «Трудовой вклад томичей в развитие народного хозяйства в 1945-1970 гг.», «Развитие Томской области с 1970 по 2020 гг.». (далее…)
«Точка Роста» оснащена современными учебными программами и оборудованием: компьютерами, 3D-принтерами, шлемами виртуальной реальности, робототехникой, оборудованием для изучения основ безопасности жизнедеятельности и оказания первой помощи. Открыт кружок «КвадраСтудия», где дети учатся управлять квадрокоптерами. Педагог Русин С.П. в этом году прошел курсы повышения квалификации «Управление беспилотными летательными аппаратами» в «Центре Беспилотных Технологий» в г. Новосибирске. Продолжает работу «Интеллего» для юных программистов. С 18.10.2021 по 24.10.2021г. проходил отборочный этап VII соревнований по образовательной робототехнике на Кубок Губернатора Томской области. Ждем результаты и болеем за наших ребят!
Индивидуальная траектория в образовании — тренд, который уже несколько лет считается основным при создании новых технологий обучения. Каждый ученик должен иметь возможность выстраивать образование в соответствии с собственными предпочтениями и талантами. И центр «Точка роста» помогает в этом, используя самые современные инструменты. С 3 по 7 ноября пройдет международная акция «Большой Этнографический Диктант».
Большой этнографический диктант — это просветительский проект, который знакомит с культурой народов, проживающих в России, а также позволяет оценить общий уровень этнокультурной грамотности.
Организаторы акции — Федеральное агентство по делам национальностей и Министерство национальной политики Удмуртской Республики.
Как стать участником?
1. В любой день с 3 по 7 ноября зайти на сайт https://miretno.ru/
2. Нажать на кнопку «Пройти Диктант»
3. Заполнить контактные данные
4. Ответить на 30 вопросов
5. Скачать сертификат участника
22 октября обучающиеся 7-9 классов прошли профессиональные пробы на базе ОГБПОУ «КСПК» в рамках реализации проекта «Билет в будущее».
«Билет в будущее» — проект ранней профессиональной ориентации учеников 6-11-х классов общеобразовательных организаций, реализуемый в рамках федерального проекта «Успех каждого ребёнка» национального проекта «Образование».
Ребята посетили мастер-классы по специальностям: «Поварское дело», «Ремонт и обслуживание легковых автомобилей».
В Рамках недели профилактики ДТП была проведена акция «Везу ребенка правильно». Учащиеся 5А класса активно приняли участие и свою работу отобразили в видеоролике.
Урок 9. Внутреннее строение и жизнедеятельность простейших | Поурочные планы по биологии 7-8 класс
Урок 9. Внутреннее строение и жизнедеятельность простейших 09.01.2015 4220 654Цели урока: закрепление знаний о жизненных свойствах организмов, выявление характерных черт строения и процессов жизнедеятельности простейших; формирование умений работать с учебными таблицами.
Оборудование: таблица «Тип Простейшие».
Ход урока
I. Организационный момент
II. Актуализация опорных знаний
1. Оказывается, не все простейшие способны активно двигаться, есть и те, которые ведут прикрепленный образ жизни. Кто они? Как тогда они добывают себе пищу, как защищаются? Слушаем сообщение «Инфузории-сувойки», Обращаем внимание на сидячий образ жизни, способы добычи пищи и защиты от врагов.
Инфузории-сувойки питаются бактериями, попадающими к ним в организм вместе с потоком воды. А как питаются другие представители одноклеточных животных и многое другое из их жизни мы узнаем сегодня на уроке.
2. Опрос по цепочке.
Прием «логическая цепочка» (отвечает 1 ученик) или «опрос по цепочке» (в построении развернутого, логически связного ответа участвует группа учащихся, — при этом рассказ одного ученика прерывается в любом месте и передается другому ученику жестом учителя).
О Составьте развернутый, логически связный ответ с использованием терминов прошлого урока: одноклеточные, простейшие, вода, жгутик, реснички, ложноножки, раздражитель, раздражимость.
Таким образом учащиеся проговаривают главные мысли прошлого урока. Подводятся итоги.
3. Индивидуальная работа по карточкам
Объясните термины: ‘
одноклеточные животные, простейшие, ложноножка, жгутик, реснички, раздражитель, раздражимость.
В каких средах жизни можно встретить простейших?
III. Изучение новой темы
Простейшими называют организмы, тело которых состоит из одной- единственной клетки с формированным ядром (эукариотической). Размеры — обычные для эукариотических клеток, — примерно 0,02-0,2 мм, но «в их лице» мы встречаемся с самой сложной организацией, известной для биологических клеток вообще. Ведь каждый одноклеточный организм — самостоятельный, и в его клетке-теле происходят такие процессы, которые у многоклеточных осуществляются лишь на уровне тканей и органов.
Функции любой клетки, органа, организма зависят от особенности их строения. Поэтому наша первая задача: по рисункам, таблице и тексту учебника рассмотреть особенности строения одноклеточных организмов. Для оформления результатов деятельности используем таблицу (Организуется самостоятельная работа по изучению нового материала по § 9).
Записываем тему урока и оформляем таблицу в тетради.
О Заполните таблицу, проставив знаки «плюс» (наличие) или «минус» (отсутствие) в каждой из трех колонок. Сделайте выводы по результатам вашей работы.
Структура | Амеба | Эвглена зеленая | Инфузория-туфелька |
Оболочка | + | + | + |
Цитоплазма | + | + | + |
Ядро | + | + | + (2) |
Ложноножки | + | _ |
|
Жгутик | _ | + | _ |
Реснички | _ | _ | + |
Пищеварительная вакуоль | + | _ | + |
Сократительная вакуоль | + | + | + |
Ротовое отверстие | _ | _ | + |
Порошица | _ | + | |
Хлоропласты | _ | + | _ |
Светочувтвительный глазок | — | + | — |
После заполнения таблицы заслушиваются выводы, сформулированные учащимися.
Важно отметить следующее:
jsS Амеба, эвглена зеленая и инфузория-туфелька — одноклеточные организмы. Клетки имеют общий план строения: оболочка, цитоплазма, ядро.
jsS Для процессов питания и выделения продуктов жизнедеятельности используются временные органеллы — пищеварительные и сократительные вакуоли, а инфузорией еще и порошица.
& Органоиды движения — ложноножки, жгутики, реснички способствуют перемещению животных в их среде обитания.
& Различия в составах клеток тесно связаны с особенностями их процессов жизнедеятельности.
О Составьте рассказы о строении амебы, эвглены и инфузории-туфельки с использованием таблицы «Тип Простейшие», отмечая участие структур клетки в жизненных процессах. (Работу проводим в группах. Обязательное условие: использование таблицы во время рассказа).
1. Класс Корненожки. Обыкновенная амеба.
Заслушиваем рассказ учащегося по таблице.
— Чем объяснить, что у пресноводных простейших частота пульсаций сократительной вакуоли выше, чем у морских и паразитических, у которых они могут вовсе отсутствовать.
Обсуждаем путь поиска ответа на проблемный вопрос.
— Какие функции выполняет сократительная вакуоль?
— Чем сходны морская вода и внутренняя среда организмов?
— Чем эти среды отличаются от пресной воды?
2. Класс Жгутиковые. Зеленая эвглена.
Заслушиваем рассказ учащегося по таблице.
3. Класс Инфузории. Инфузория-туфелька.
Заслушиваем рассказ учащегося по таблице.
Подводим итоги самостоятельной работы учащихся по изучению новой темы.
Все органоиды клетки простейшего и процессы, в которых они участвуют, друг с другом очень сильно взаимосвязаны. Эти процессы обеспечивают жизнедеятельность клетки, ее рост, деление, постоянные контакты с окружающей средой. Всю совокупность процессов, протекающих в клетке, называют обменом веществ. Попробуем в виде рисунка-схемы показать взаимосвязь между структурами клетки амебы обыкновенной (Идет беседа с учащимися).
Полный текст материала смотрите в скачиваемом файле.
На странице приведен только фрагмент материала.
Контрольная работа по биологии по теме «Строение клетки» | Учебно-методический материал по биологии (5 класс) на тему:
Контрольная работа № 2 по теме «Строение клетки»
Вариант 1
Часть А. В предложенных заданиях необходимо выбрать и обвести ОДИН номер верного
ответа из четырех предложенных. (Каждый правильный ответ 1 балл)
1. Чтобы рассмотреть устройство клетки, необходимо приготовить:
1) штативную лупу 2) увеличительное стекло
3) ручную лупу 4) микропрепарат
2. Процесс размножения клетки называют:
1) дыханием 2) делением
3) питанием 4) ростом
3. Зелёный цвет растений обусловлен присутствием в клетках особых зелёных пластид:
1) вакуолей 2) лейкопластов
3) хлоропластов 4) цитоплазмы
4. Основную часть старой клетки занимает:
1) ядро 2) вакуоль
3) цитоплазма 4) оболочка
5. Клетки бактерий имеют:
1) клеточную стенку 2) ядро
3) ядерное вещество 4) ядрышко
6. Простейшим увеличительным прибором является:
1) световой микроскоп 2) штативная лупа
3) электронный микроскоп 4) ручная лупа
7. Основным запасным питательным растительных клеток является:
1) крахмал 2) вода
3) клейковина 4) масло
8. Все живые клетки растения дышат, что проявляется в виде
1) выделения углекислого газа 2) выделения кислорода
3) почвенного питания 4) роста и размножения
9. Резервуары, в которых накапливается клеточный сок, называются
1) пластиды 2) вакуоли
3) лейкопласты 4) цитоплазма
10. Защищает содержимое клетки от внешних воздействий
1) цитоплазма 2) вакуоль
3) ядро 4) оболочка
11. В цитоплазме одноклеточной водоросли хлореллы располагается один пластид,
который называется:
1) хлоропласт 2) хроматофор
3) лейкопласт 4) хромопласт
12. У инфузории-туфельки процесс удаления избытка воды и продуктов обмена
происходит через:
1) пищеварительные вакуоли 2) сократительные вакуоли
3) оболочку 4) цитоплазму
13. Пресноводную гидру относят к:
1) многоклеточным животным 2) колониальным организмам
3) многоклеточным гриба 4) многоклеточным растениям
14. В клетках семян гороха, фасоли, чечевицы содержится большое количество:
1) белка 2) соли
3) масла 4) сахара
15. Каким ученым была открыта клетка:
1) Антони ван Левенгуком 2) Шлейден Матиасом
3) Робертом Гуком 4) Шванн Теодором
16. Основным веществом клетки является:
1) вода 2) белок
3) соли 4) крахмал
Часть В. В предложенных заданиях ответ необходимо записать в виде числа или набора
символов. (Правильный ответ 2 балла)
В1.Установите соответствие между частью клетки и функцией, которую она выполняет.
Для этого к каждому элементу первого столбца подберите позицию из второго столбца.
Впишите в таблицу цифры выбранных ответов.
ФУНКЦИЯ | ЧАСТЬ КЛЕТКИ |
А) способствует проникновению веществ в клетку | 1) клеточная оболочка |
Б) способствует обеспечению всех процессов жизнедеятельности | 2) цитоплазма |
В) способствуют передвижению веществ по клетке | |
Г) обеспечивают защиту от проникновения вредных веществ | |
Д) является внутренней средой клетки |
В2. Установите соответствие между частями клетки и особенностями их строения. Для этого
к каждому элементу первого столбца подберите позицию из второго столбца.
Впишите в таблицу цифры выбранных ответов.
ОСОБЕННОСТИ СТРОЕНИЯ | ЧАСТИ КЛЕТКИ |
А) содержат клеточный сок | 1) вакуоли |
Б) могут быть окрашены в зелёный цвет | 2) пластиды |
В) содержат растворимые в воде вещества | |
Г) запасают крахмал, белки или масла | |
Д) представляют собой полости-резервуары |
В3. Расположите в правильном порядке события, которые происходят при делении клетки:
1) переход хромосом к противоположным концам клетки
2) расположение хромосом по «экватору» клетки
3) распад оболочки ядра
4) удвоение числа хромосом
5) образование перегородки в средней части клетки
6) образование материнской и дочерней клетки
Часть С. Запишите полный развернутый письменный ответ на предложенный вопрос (3 балла).
С1. Что общего в строении клеток всех эукариот?
Контрольная работа № 2 по теме «Строение клетки»
Вариант 2
Часть А. В предложенных заданиях необходимо выбрать и обвести номер верного ответа из четырех предложенных. Каждый правильный ответ 1 балл.
1. За счёт деления клеток происходит:
1) заживление ран 2) листопад у растений
3)фотосинтез 4) вытекание крови из раны
2.Сложный прибор, с помощью которого можно рассмотреть клеточное строение растения, называется:
1) увеличительное стекло 2) микроскоп
3) штативная лупа 4) микропрепарат
3. Ядро является главным органоидом, потому что оно:
1) самый крупный органоид 2) передвигается по цитоплазме
3) участвует в делении клетки 4) производит питательные вещества
4. В клетках семени подсолнечника содержатся капли особых запасных питательных веществ
1) крахмала 2) масел
3) солей 4) белков
5. Клеточного строения НЕ имеют
1) некоторые виды инфузорий 2) плесневые грибы
3) бактерии 4)вирусы
6. В животной клетке отсутствуют:
1) ядро 2)митохондрии
3) пластиды 4) цитоплазма
7. Линзы, расположенные выше тубуса светового микроскопа, образуют
1) объектив 2) штатив
3) окуляр 4) зеркало
8. К углеводам относят:
1) интерферон 2) инсулин
3) крахмал 4) гемоглобин
9. Вязкое вещество, заполняющее клетку- это
1) ядро 2)цитоплазма
3)мембрана 4) ядерное вещество
10. Клеточную оболочку поверх мембраны НЕ имеют клетки:
1)растений 2) животных
3) грибов 4)бактерий
11. К ядерным (имеющих ядро) организмам относятся:
1) растения, животные и бактерии 2) растения, животные и грибы
3) бактерии, грибы и растения 4) бактерии, грибы и животные
12. Вакуоль- это органоид, который:
1) запасает воду и минеральные вещества 2)регулирует все процессы жизнедеятельности
3) выполняет защитную функцию 4) улавливает энергию солнечных лучей
13.Хлоропласты в клетке
1) осуществляют фотосинтез 2)поддерживают давление
3)накапливают воду и минеральные вещества 4) выполняет защитную функцию
14. Клеточное ядро открыл
1) Р. Гук 2) А. Левенгук
3) Р. Броун 4) М. Шлейден
15. Амёбу относят к
1) одноклеточным животным 2) колониальным организмам
3) многоклеточным гриба 4) одноклеточным растениям
16.Хроматофоры хлореллы и хламидомонады
1)удаляют излишки воды из клетки 2)осуществляют фотосинтез
3) обеспечивают подвижность 4)запасают воду и мин. вещества
Часть В. В предложенных заданиях ответ необходимо записать в виде числа или набора
символов. (Правильный ответ 2 балла)
В1. Установите соответствие между частями клетки и выполняемыми ими функциями (одна функция лишняя) Для этого к каждому элементу первого столбца подберите одну позицию из второго столбца. Запишите цифры выбранных ответов.
Найдите соответствие между частями клетки и функциями.
Части клетки | Функция |
А) ядро | 1) обеспечивает движение клетки |
Б) плазматическая мембрана | 2)запасает воду и минеральные вещества |
В) жгутик | 3) защищает клетку от повреждений |
4) регулирует все процессы в клетке |
В2. Что из перечисленного явления частью животной клетки? Выберите три верных ответа из шести и запишите цифры, под которыми они указаны
1)Мембрана 4) цитоплазма
2) клеточная стенка 5) Вакуоль
3) Хлоропласт 6) ядро
В3. Определите органоиды амёбы, обозначенные на рисунке:
- Сократительная вакуоль
- Ложноножка
- Ядро
- Цитоплазма
- Пищеварительная вакуоль
1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
б | в | а | д | г |
Часть С. Запишите полный развернутый письменный ответ на предложенный вопрос (3 балла).
В клетках каких живых организмов присутствуют хлоропласты? Какова их функция (зачем они нужны)?
простейших | микроорганизм | Британника
простейшее , организм, обычно одноклеточный и гетеротрофный (использующий органический углерод в качестве источника энергии), принадлежащий к любой из основных ветвей протистов и, как большинство протистов, обычно микроскопический. Все простейшие являются эукариотами и поэтому обладают «истинным», или мембраносвязанным, ядром. Они также не содержат волокон (в отличие от организмов, таких как плесень, группа грибов, которые имеют волокна, называемые гифами) и ограничены влажными или водными средами обитания, будучи повсеместными в таких средах по всему миру, от Южного полюса до Северного полюса.Многие из них являются симбионтами других организмов, а некоторые виды — паразитами.
Современные ультраструктурные, биохимические и генетические данные сделали термин простейшее весьма проблематичным. Например, простейшие исторически относились к простейшим, имеющим животные черты, такие как способность перемещаться по воде, как если бы они «плыли», как животное. Традиционно считалось, что простейшие являются прародителями современных животных, но современные данные показали, что для большинства простейших это не так.Фактически, современная наука показала, что простейшие представляют собой очень сложную группу организмов, которые не обязательно имеют общую эволюционную историю. Эта несвязанная или парафилетическая природа простейших заставила ученых отказаться от термина простейшие в формальных классификационных схемах. Следовательно, подкоролевство Protozoa теперь считается устаревшим. Сегодня термин простейшие используется неофициально по отношению к нефиламентным гетеротрофным протистам.
амебаАмеба (увеличено).
Русс Кинн / ФотоисследователиБританская викторина
Наука и случайная викторина
К какому царству принадлежат грибы? Какой динозавр был хищником размером с курицу? Проверьте свои знания обо всем в науке с помощью этой викторины.
К широко известным простейшим относятся типичные динофлагелляты, амебы, парамеции и вызывающий малярию Plasmodium .
Особенности простейших
Наблюдать за простейшими микроорганизмами из капли воды в пруду под оптическим и электронным микроскопом.
Парамеции и другие одноклеточные организмы в воде пруда.
Encyclopædia Britannica, Inc. Посмотреть все видео к этой статьеХотя простейшие больше не признаются в качестве формальной группы в существующих системах биологической классификации, простейшие все еще могут использоваться как строго описательный термин. Простейших объединяет их гетеротрофный способ питания, что означает, что эти организмы получают углерод в восстановленной форме из окружающей среды.Однако это не уникальная особенность простейших. Кроме того, это описание не так однозначно, как кажется. Например, многие протисты являются миксотрофами, способными как к гетеротрофии (вторичное получение энергии за счет потребления других организмов), так и к аутотрофии (получение первичной энергии, например, путем захвата солнечного света или метаболизма химических веществ в окружающей среде). Примеры миксотрофов простейших включают многие хризофиты. Некоторые простейшие, такие как Paramecium bursaria , развили симбиотические отношения с эукариотическими водорослями, в то время как амеба Paulinella chromatophora , по-видимому, приобрела автотрофность в результате относительно недавнего эндосимбиоза цианобактерии (сине-зеленой водоросли).Следовательно, многие простейшие либо сами осуществляют фотосинтез, либо пользуются фотосинтетическими способностями других организмов. Однако некоторые виды водорослей простейших утратили способность к фотосинтезу (например, видов Polytomella и многие динофлагелляты), что еще больше усложняет концепцию «простейших».
репрезентативных простейшихрепрезентативных простейших. Фитофлагеллята Gonyaulax — одна из динофлагеллят, ответственных за появление красных приливов.Зоофлагеллята Trypanosoma brucei является возбудителем африканской сонной болезни. Амеба — один из самых распространенных саркодинов. Другие представители подтипа Sarcodina, такие как радиолярии, гелиозоиды и фораминиферы, обычно обладают защитным покровом. Светлячок Pinaciophora показан покрытым чешуей. Тип Ciliophora, включающий ресничные Tetrahymena и Vorticella, , содержит наибольшее количество видов простейших, но является наиболее однородной группой.Плазмодий , вызывающий малярию, распространяется через укус комара, который вводит инфекционные споры (спорозоиты) в кровоток.
© Merriam-Webster Inc. Получите подписку Britannica Premium и получите доступ к эксклюзивному контенту. Подпишитесь сейчасПростейшие подвижны; почти все обладают жгутиками, ресничками или псевдоподиями, которые позволяют им перемещаться в своих водных средах обитания. Однако эта общность не является уникальной чертой простейших; например, организмы, которые явно не являются простейшими, также производят жгутики на различных стадиях своего жизненного цикла (например,г., большинство бурых водорослей). Простейшие также строго не являются многоклеточными и существуют либо в виде одиночных клеток, либо в виде клеточных колоний. Тем не менее, некоторые колониальные организмы (например, Dictyostelium discoideum , супергруппа Amoebozoa) демонстрируют высокий уровень клеточной специализации, граничащий с многоклеточностью.
Из описательных руководств, представленных выше, исключаются многие организмы, такие как жгутиковые фотосинтетические таксоны (ранее Phytomastigophora), которые считались простейшими по старым классификационным схемам.Организмы, которые соответствуют современному определению простейших, встречаются во всех основных группах простейших, признанных протистологами, что отражает парафилетическую природу простейших.
Узнайте, как отдельные реснички используют вязкое сопротивление для координации мощности и движений восстановления для передвижения.
Узнайте о скоординированном биении ресничек, которые перемещают простейших через воду.
Encyclopædia Britannica, Inc. Посмотреть все видео к этой статьеНаиболее важные группы свободноживущих простейших встречаются в нескольких основных эволюционных кластерах протистов, включая инфузории (супергруппа Chromalveolata), лобозные амебы (супергруппа Amoebozoa), филозные амебы (супергруппа Rhizaria), криптомонады (супергруппа Chromalveolata), раскопки (супергруппа Excavata), опистоконты (супергруппа Opisthokonta) и эвглениды (Euglenozoa).Эти группы организмов важны с экологической точки зрения благодаря своей роли в круговоротах питательных веществ микробов и встречаются в самых разных средах, от земных почв до пресноводных и морских сред обитания до водных отложений и морского льда. Значительные простейшие паразиты включают представителей Apicomplexa (супергруппа Chromalveolata) и трипаносом (Euglenozoa). Организмы этих групп являются возбудителями таких заболеваний человека, как малярия и африканская сонная болезнь. Из-за преобладания этих патогенов человека и экологической важности вышеупомянутых свободноживущих групп простейших, об этих группах известно много.Поэтому данная статья концентрируется на биологии этих сравнительно хорошо охарактеризованных простейших. В конце статьи приводится краткое изложение современной классификационной схемы протистана.
Характеристики одноклеточных организмов табл. Общая характеристика одноклеточных (простейших)
В суб-царство Простейшие включают одноклеточных животных. Некоторые виды образуют колонии.
Клетка простейших имеет ту же структурную схему, что и клетка многоклеточного животного: она ограничена мембраной, внутреннее пространство заполнено цитоплазмой, содержащей ядро (ядра), органеллы и включения.
Клеточная мембрана у одних видов представлена наружной (цитоплазматической) мембраной, у других — мембраной и пленкой. Некоторые группы простейших образуют вокруг себя оболочку. Мембрана имеет структуру, типичную для эукариотической клетки: она состоит из двух слоев фосфолипидов, в которые на разной глубине «погружены» белки.
Количество ядер — одно, два или больше. Форма ядра обычно круглая. Ядро ограничено двумя мембранами, эти мембраны пронизаны порами.Внутреннее содержимое ядра — это ядерный сок (кариоплазма), который содержит хроматин и ядрышки. Хроматин состоит из ДНК и белков и является интерфазной формой существования хромосом (деконденсированных хромосом). Ядрышки состоят из рРНК и белков и являются местом формирования субъединиц рибосомы.
Внешний слой цитоплазмы обычно более светлый и плотный — эктоплазма, внутренний слой — эндоплазма.
Цитоплазма содержит органеллы, характерные как для клеток многоклеточных животных, так и органеллы, характерные только для этой группы животных.Органоиды простейших, общие с органеллами клеток многоклеточного животного: митохондрии (синтез АТФ, окисление органических веществ), эндоплазматический ретикулум (транспорт веществ, синтез различных органических веществ, компартментализация), комплекс Гольджи (накопление, модификация , секреция различных органических веществ, синтез углеводов и липидов, место образования первичных лизосом), лизосомы (расщепление органических веществ), рибосомы (синтез белка), центр клетки с центриолями (образование микротрубочек, в частности микротрубочек веретена деления), микротрубочки и микрофиламенты (цитоскелет).Органоиды простейших, характерные только для этой группы животных: стигма (световосприятие), трихоцисты (защита), аксостиль (опора), сократительные вакуоли (осморегуляция) и др. Фотосинтетические органоиды, обнаруженные в жгутиках растений, называются хроматофорами. Органеллы движения простейших представлены псевдоподиями, ресничками, жгутиками.
Питание — гетеротрофное; у жгутиконосцев растений — автотрофный, может быть миксотрофным.
Газообмен происходит через клеточную мембрану, подавляющее большинство простейших — аэробные организмы.
Реакция на раздражители внешней среды (раздражительность) проявляется в виде такси.
При возникновении неблагоприятных условий большинство простейших образуют цисты. Encystation — это способ попасть в неблагоприятные условия.
Основным методом размножения простейших является бесполое размножение: а) деление материнской клетки на две дочерние клетки, б) деление материнской клетки на множество дочерних клеток (шизогония), в) почкование. Бесполое размножение основано на митозе. У ряда видов имеет место половой процесс — конъюгация (инфузории) и половое размножение (спорозоиды).
Среда обитания: море и пресные водоемы, почва, организмы растений, животных и человека.
Классификация простейших
- Subkingdom Protozoa, или одноклеточные (Protozoa)
- Sarcomastigophora type
- Subtype Flagellates (Mastigophora)
- Class Flagellates (Phytomastigophorea)
- Класс Жгутиконосцы животных (Zoomastigophorea)
- Опалината подтип
- Подтип Sarcodina
- Класс Rhizopoda Класс
- Radiolaria, или Radiolaria
- Подсолнухи класса (Heliozoa)
- Subtype Flagellates (Mastigophora)
- Тип Apicomplexa
- Perkinsea class
- Класс Sporozoa (Sporozoea)
- Тип миксоспоридий (Myxozoa)
- Класс Myxosporea
- Класс Actinosporea
- Микроспора тип
- Тип инфузорий (Ciliophora)
- Класс Инфузории (Ciliata) Класс
- Сосущие инфузории (Suctoria)
- Лабиринтоморфный тип
- Ascetospora тип
- Sarcomastigophora type
Самые простые оказались около 1.5 миллиардов лет назад.
Простейшие принадлежат к примитивным одноклеточным эукариотам (суперцарство Eucariota). В настоящее время принято считать, что эукариоты произошли от прокариот. Существует две гипотезы происхождения эукариот от прокариот: а) последовательная, б) симбиотическая. Согласно последовательной гипотезе, мембранные органеллы постепенно возникают из плазмалеммы прокариот. Согласно симбиотической гипотезе (эндосимбиотическая гипотеза, гипотеза симбиогенеза), эукариотическая клетка возникает в результате серии симбиоза нескольких древних прокариотических клеток.
Класс Жгутиковые
Структура … Жгутики имеют жгутики, которые служат органеллами движения и облегчают захват пищи. Их может быть один, два или несколько. Движение жгутика в окружающей воде вызывает водоворот, из-за которого взвешенные в воде мелкие частицы уносятся к основанию жгутика, где есть небольшое отверстие — клеточное устье, ведущее в глубокий глоточный канал.
Практически все жгутики покрыты плотной эластичной мембраной, которая вместе с развитыми элементами цитоскелета определяет неизменную форму тела.
Генетический аппарат у большинства жгутиконосцев он представлен одним ядром, но есть также двухъядерные (например, лямблии) и многоядерные (например, опалиновые) виды.
Цитоплазма он четко разделен на тонкий внешний слой — прозрачную эктоплазму и более глубокую эндоплазму.
Пищевой способ. По способу питания жгутиконосцы делятся на три группы. Автотрофные организмы, как исключение в животном мире, синтезируют органическое вещество (углеводы) из углекислого газа и воды, используя хлорофилл и солнечную энергию.Хлорофилл содержится в хроматофорах, сходных по организации с пластидами растений. У многих жгутиконосцев с растительным типом питания есть специальные аппараты, воспринимающие световые раздражители — рыльца.
Гетеротрофные организмы (трипаносома — возбудитель сонной болезни) не имеют хлорофилла и поэтому не могут синтезировать углеводы из неорганических веществ … Миксотрофные организмы способны к фотосинтезу, но они также питаются минеральными и органическими веществами, созданными другими организмами (эвглена зеленый).
Осморегулятор и частично экскреторные функции у жгутиконосцев, как и в саркодах, выполняются сократительными вакуолями, которые обнаруживаются у свободноживущих пресноводных форм.
Репродукция. У жгутиконосцев отмечается половое и бесполое размножение. Обычная форма бесполого размножения — продольное деление.
Habitat. Жгутиконосцы широко распространены в пресных водоемах, особенно в небольших и загрязненных органическими остатками, а также в морях. Многие виды паразитируют у различных животных и людей и, таким образом, приносят большой вред (трипоносомы, кишечные паразиты и т. Д.).
1. Общие характеристики одноклеточный.
Под царство простейших входят животные, тело которых состоит из одной клетки (бывают также многоклеточные, колониальные). Но эта клетка представляет собой целостный самоподдерживающийся организм, поэтому имеет более сложное строение, чем клетка многоклеточного организма. Помимо основных компонентов, присущих всем клеткам, цитоплазма простейших содержит особые органеллы: пищеварительные и сократительные вакуоли, опорные и защитные структуры.
Для многих простейших характерно переживание неблагоприятных условий в виде цист. При энцистировании органелл движения исчезают, клетка покрывается плотной оболочкой. Животные переходят в состояние покоя, а при наступлении благоприятных условий оболочка кисты лопается и организм возвращается к активной жизни.
2. Особенности строения одноклеточного организма на примере амебы.
Amoeba protea — типичный представитель одноклеточных, относящийся к классу корневых поражений подтипа саркоидного типа Sarcomastigophora.Название Sarcodes означает протоплазма. Для этих животных характерна нестабильная форма тела, так как клетка имеет только клеточную мембрану. Органеллы движения — ложноножки (псевдоподии) — постоянно меняющие форму выростов клеточной мембраны, в которые впадает цитоплазма. Материал с сайта
Protea amoeba — пресноводный организм. Размеры корпуса достигают 0,5 мм. С помощью ложноножек происходит не только движение, но и захват пищи. Питается животное бактериями, одноклеточными водорослями, мелкими простейшими.Способ питания — фагоцитоз. С помощью ложек амеба обтекает частицу пищи со всех сторон, втягивая ее внутрь. В этом случае образуется пищеварительная вакуоль, в которую из лизосом попадают пищеварительные ферменты. Непереваренные остатки выбрасываются через мембрану в любом месте клетки. У амебы возможен пиноцитоз — всасывание растворенных органических веществ из окружающей среды … В теле амебы заметна одна довольно крупная сократительная вакуоль.Периодически пульсируя, он выбрасывает лишнюю воду с растворенными в ней продуктами жизнедеятельности. Основная функция сократительной вакуоли — регулирование осмотического давления в организме животного. У амебы одно ядро. Бесполое размножение осуществляется митозом с последующим делением тела амебы надвое. При наступлении неблагоприятных условий (понижение температуры, пересыхание водоема) амеба инцистируется. Количество амеб в водоемах может быть значительным, и поэтому они составляют важное звено в пищевых цепях этих экосистем.
Мировая фауна насчитывает около 70 000 видов одноклеточных животных.
Практически все простые имеют микроскопические размеры (от 2 мкм до 0,2 мм), среди них есть и колониальные формы (Volvox). Обитают в пресной воде (амеба обыкновенная, эвглена зеленая, инфузория башмачная, вольвокс) и морских водоемах (фораминиферы, променяки), в почве (некоторые виды амеб, жгутиконосцы, инфузории).
Самые простые из них — представители животного мира на клеточном уровне организации.Морфологически они составляют одну клетку, а функционально — целостный организм. Следовательно, клетка простейших устроена намного сложнее, чем клетка многоклеточного организма.
Это связано с тем, что клетки многоклеточных организмов выполняют только определенные функции, в то время как одна клетка простейших выполняет все жизненно важные функции, присущие всему организму: питание, движение, выделение, дыхание, размножение и т. Д.
Особенности строения и жизни одноклеточных организмов (простейших)
Клетка простейших, как и любая эукариональная клетка, имеет общие клеточные органеллы.В цитоплазме простейших различают два слоя: внешний слой — это эктоплазма, а внутренний — эндоплазма. Кроме того, у простейших есть характерные только для них органеллы: движения (ложноножки, жгутики, реснички), пищеварение (пищеварительные вакуоли, у инфузорий — клетка рта, глотки), экскреция и осморегуляция (сократительные вакуоли).
Клетка одноклеточных животных содержит одно (амеба, эвглена) или несколько (инфузории) ядер. Подавляющее большинство одноклеточных организмов обладают способностью двигаться.С помощью временных выпуклостей цитоплазмы — ложные ножки (псевдонижок), передвигаются простые, лишенные плотной клеточной мембраны (амебы). Жгутики (эвглена зелёная) и реснички (ресничный башмак) способствуют быстрому перемещению одноклеточных организмов.
Способы питания простейших разнообразны. Большинство из них питаются гетеротрофно. У амеб пища попадает в цитоплазму с помощью захватывающих ее псевдоподий. У инфузорий колебания ресничек заставляют пищу попадать в клеточный рот и глотку.
Переваривание пищи происходит в пищеварительных вакуолях. Непереваренные остатки пищи удаляются из клетки в любом месте, к которому подходит пищеварительная вакуоль (амеба), или через специальные отверстия (порошок в инфузорном ботинке).
Среди одноклеточных животных есть виды, питающиеся зелеными растениями (Volvox). Их цитоплазма содержит хроматофоры — органеллы с фотосинтетическими пигментами. Для некоторых жгутиконосцев с хроматофорами (эвглена зеленая) характерен смешанный (миксотрофный) тип питания.В мире они способны к фотосинтезу, а в темноте питаются готовыми органическими веществами.
Дыхание осуществляется потоком кислорода через всю поверхность клетки. Он окисляет сложные органические вещества до CO 2, H 2 O и других соединений. При этом выделяется энергия, которая используется для жизнедеятельности животных.
Простейшие характеризуются бесполым и половым размножением. Бесполое размножение осуществляется делением и бутонированием.Чаще одноклеточные подразделения материнского тела размножаются на две дочерние клетки.
Для инфузорий-туфельок помимо перерезки характерен половой процесс, в ходе которого две инфузории временно соединяются между собой и обмениваются небольшими ядрами. Таким образом, инфузории обмениваются генетической (наследственной) информацией, содержащейся в их ядрах.
Раздражительность присуща одноклеточным организмам — ответная реакция организма на внешние воздействия. Неблагоприятные условия окружающей среды переносятся одноклеточными организмами в состояние кисты — клетка округлая, сжатая, втягивает в себя органеллы движения и покрыта толстой оболочкой.
Процессы почвообразования также осуществляются с помощью простейших. Жгутиковые одноклеточные используют для биологической оценки степени чистоты водоемов (биодиагностика). Фораминиферы и променады играют важную роль в формировании отложений мела и известняка, которые являются ценными строительными материалами.
Определение 1
Одноклеточные (простейшие) — организмы, в которых все функции живого выполняет одна клетка.
Помимо прокариот, к ним относятся одноклеточные эукариоты, в том числе растения, животные и грибы.
Особенности одноклеточных организмов
Размеры простейших микроскопически малы. К особенностям одноклеточных организмов можно отнести то, что они с помощью клеточных органелл выполняют все функции живых существ и представляют собой отдельный самостоятельный организм, представленный всего одной клеткой. По строению и набору органелл клетки одноклеточных организмов сходны с клетками многоклеточных организмов. Среди одноклеточных эукариот выделяют как простейшие организмы (амеба, хлорелла), так и довольно сложные (инфузории, вертлужные впадины).
Если клетки многоклеточных организмов характеризуются дифференцировкой функций и неспособностью выполнять сразу все функции живого, то одноклеточные организмы сохраняют эту способность. Высокий уровень их организации — сотовый. Клетка одноклеточных организмов представляет собой целостный организм, обладающий всеми свойствами живых существ: обмен веществ, раздражительность, рост, размножение и тому подобное.
Их тело состоит из цитоплазмы, в которой различают внешний слой — эктоплазму, а внутренний слой — эндоплазму.У большинства видов клетка снаружи покрыта мембраной, которая придает одноклеточному животному постоянную форму. У простейших появляются органеллы, выполняющие различные функции:
- пищеварение (пищеварительные вакуоли),
- отделяемое (сократительные вакуоли),
- движения (жгутики, реснички),
- световосприятие (светочувствительный глаз)
и другие органеллы, обеспечивающие все жизненно важные процессы. По способу питания это гетеротрофные организмы.Самым простым характерна раздражительность, которая проявляется в различных движениях — такси. Есть положительное такси — движение к стимулу и отрицательное такси — движение от стимула.
При воздействии неблагоприятных условий простейшие образуют цисты. Энцистирование — важная биологическая особенность простейшего вида. Это не только обеспечивает переживание неблагоприятных условий, но и способствует широкому заселению.
Водные одноклеточные
Морские одноклеточные животные, такие как фораминиферы и радиолярии, имеют внешний скелет в виде известкового панциря.Инфузории — высокоорганизованные одноклеточные животные. Реснички выступают в них как органеллы движения, тело покрыто прочной эластичной оболочкой, которая обеспечивает ему постоянную форму … Большинство инфузорий имеют два ядра: большое и маленькое. Большое вегетативное ядро - регулирует процессы движения, питания, выделения, а также бесполое размножение, осуществляемое путем поперечного деления клеток пополам. Маленькое ядро является генеративным, оно выполняет важную функцию в половом процессе.
Среди водных одноклеточных организмов также выделяют миксотрофы — организмы, которые могут питаться как посредством фотосинтеза, так и гетеротрофно.Например, эвглена зеленая.
Эвглена обитает в пресноводных водоемах и плавает с помощью единственного жгутика, расположенного на переднем конце тела. В цитоплазме эвглены находятся хлоропласты, содержащие хлорофилл, что позволяет эвглене питаться фототрофами. При отсутствии света переходит на гетеротрофное питание. Благодаря этому свойству эвглена сочетает в себе признаки растения и животного, что свидетельствует об эволюционном единстве растительного и животного мира.
Одноклеточные растения и грибы
Примечание 1
В природе много не только одноклеточных животных, но и одноклеточных растений и грибов. Например, среди зеленых водорослей к представителям одноклеточных водорослей относятся хламидомонада и хлорелла, а среди грибов — одноклеточные дрожжи.
Одноклеточные растения и животные представляют собой типичные эукариотические клетки с соответствующими органеллами:
- поверхностная мембрана
- ядро,
- митохондрий,
- Аппарат Гольджи,
- эндоплазматическая сеть,
- рибосом.
Различия в строении одноклеточных животных и одноклеточных растений связаны с различиями в способах их кормления. Для растительных клеток характерно наличие пластид, вакуолей, клеточных стенок и других особенностей, связанных с фотосинтезом. Клетки животных характеризуются наличием гликокаликса, пищеварительных вакуолей и других особенностей, связанных с гетеротрофным питанием.
У грибов клетка имеет клеточную стенку, это показывает сходство грибов с бактериями и растениями.Но грибы — гетеротрофы, и это делает их похожими на животных.
Одноклеточные эукариоты размножаются преимущественно бесполым путем, но у некоторых из них (например, инфузорий-башмачок) наблюдается половой процесс — обмен генетической информацией, у других (например, у хламидомонады) половое размножение происходит. Бесполое размножение происходит путем деления клетки пополам с помощью митоза. Во время полового размножения образуются гаметы, которые затем сливаются в зиготу.
Замечание 2
Энциклопедия гигиены и безопасности труда МОТ
Американский институт нефти
Американский институт педиатрии (API) — ведущий университет США.S. торговая ассоциация нефтяной и газовой промышленности, которая представляет компании, занимающиеся добычей, переработкой, распределением и другими аспектами нефтяной промышленности.
ПодробнееКанадский профсоюз работников автомобильной промышленности
Канадский профсоюз работников автомобильной промышленности (CAW) — крупнейший профсоюз частного сектора в Канаде, представляющий рабочих практически во всех секторах канадской экономики.
ПодробнееЕвропейское агентство по безопасности и гигиене труда
Европейское агентство по безопасности и гигиене труда (EU-OSHA) было создано с целью сделать рабочие места в Европе безопаснее, здоровее и продуктивнее.Это достигается путем объединения и обмена знаниями и информацией в целях развития культуры предотвращения рисков.
ПодробнееКанадский центр гигиены и безопасности труда
Канадский центр гигиены и безопасности труда (CCOHS) способствует общему благополучию — физическому, психосоциальному и психическому здоровью — работающих канадцев, предоставляя информацию, обучение, образование, системы управления и решения, которые поддерживают программы в области здравоохранения, безопасности и благополучия.
ПодробнееКанадский трудовой конгресс
Канадский конгресс труда объединяет национальные и международные профсоюзы Канады, федерации труда провинций и территорий и 130 окружных советов по труду.
ПодробнееЦентр защиты прав трудящихся
Центр защиты прав рабочих (CPWR), ныне называемый Центром исследований и обучения в строительстве, является международным лидером в области прикладных исследований, обучения и оказания услуг строительной отрасли.
ПодробнееИсполнительный орган по охране труда и технике безопасности
Health and Safety Executive (HSE) — национальный независимый регулирующий орган, действующий в общественных интересах с целью сокращения числа смертей и серьезных травм, связанных с работой, на рабочих местах в Великобритании.
ПодробнееInstitut Arbeit und Gesundheit der Deutschen Gesetzlichen Unfallversicherung
( IAG — Институт работы и здравоохранения Немецкого социального страхования от несчастных случаев)
Институт труда и здоровья Немецкого социального страхования от несчастных случаев (IAG) является частью Академии DGUV в Дрездене, содействуя безопасности и здоровью на рабочем месте посредством обучения, исследований и разработок, а также консультирования и поддержки Немецкого социального страхования от несчастных случаев. .
ПодробнееInstitut fur Arbeitsphysiologie
Исследовательский центр производственной среды и человеческого фактора имени Лейбница ( IfADo ) исследует возможности и риски современной работы на основе поведенческих наук и наук о жизни. Результаты нашего исследования используются для разработки новых правил и инструкций по созданию благоприятной и здоровой рабочей среды.
ПодробнееInstitut National de Recherche et de Securite
Национальный институт исследований и безопасности (INRS) проводит исследования и исследовательские программы для улучшения здоровья и безопасности мужчин и женщин на работе во Франции, от токсикологических опасностей до физического и психологического благополучия.
ПодробнееИнститут медицины труда и гигиены окружающей среды
ДеятельностьИнститута медицины труда и гигиены окружающей среды включает: исследования, экспертизу и обучение в области общественного здравоохранения, медицины труда и оценки воздействия на здоровье окружающей среды, диагностику и лечение профессиональных заболеваний и заболеваний окружающей среды, а также осуществление мер по укреплению здоровья и профилактике заболеваний.
ПодробнееInstitut de recherche Robert-Sauvé en santé et en sécurité du travail
Основанный в Квебеке с 1980 года, Institut de recherche Robert-Sauvé en santé et en sécurité du travail (IRSST) — это научно-исследовательская организация, известная качеством своей работы и опытом своего персонала.
Институт — частное некоммерческое агентство.
Его совет директоров состоит из равного числа представителей профсоюзов и работодателей, что делает его совместным органом.
Комиссия по безопасности и охране труда (CSST) обеспечивает большую часть финансирования Института за счет взносов, которые он собирает от работодателей.
ПодробнееИнститут науки о труде
Институт является независимой некоммерческой исследовательской организацией под эгидой Министерства образования, культуры, спорта, науки и технологий Японии.
ПодробнееInstituto Seguros Sociales
Одна из крупнейших организаций в правительстве Колумбии, Instituto Seguros Sociales, предоставляет медицинские услуги и гарантированные пенсии миллионам колумбийцев.
ПодробнееМеждународная организация по стандартизации
Международная организация по стандартизации (ISO) — крупнейший в мире разработчик и издатель международных стандартов. ISO — это сеть национальных институтов стандартов 160 стран, по одному члену от страны, с центральным секретариатом в Женеве, Швейцария.
ПодробнееНациональная ассоциация противопожарной защиты
Национальная ассоциация противопожарной защиты — это некоммерческая организация, целью которой является снижение глобального бремени пожаров и других опасностей путем предоставления и защиты согласованных кодексов и стандартов, проведения исследований, обучения и образования.
ПодробнееШвейцарский национальный фонд страхования от несчастных случаев (ныне SUVA)
Suva, некоммерческая компания, ранее известная как Швейцарский национальный фонд страхования от несчастных случаев, предоставляет продукты страхования от несчастных случаев, а также услуги по профилактике и реабилитации промышленных предприятий в Швейцарии.
ПодробнееТётервейслайтос
Финский институт гигиены труда, FIOH, является исследовательской и специализированной организацией в области охраны труда и техники безопасности.
ПодробнееUnited Food and Commercial Workers
United Food and Commercial Workers (UFCW) насчитывает 1,3 миллиона членов профсоюзов, работающих в различных отраслях, большинство из которых работают в розничной торговле продуктами питания, упаковке мяса и птицы, пищевой промышленности и производстве, а также в розничных магазинах.
ПодробнееВсемирная организация здравоохранения
В рамках Организации Объединенных Наций Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) отвечает за руководство по вопросам глобального здравоохранения, формирование повестки дня медицинских исследований, установление норм и стандартов, формулирование вариантов политики, основанных на фактических данных, оказание технической поддержки странам, а также мониторинг и оценку состояния здоровья. тенденции.
ПодробнееАмериканская ассоциация промышленной гигиены
Американская ассоциация промышленной гигиены (АМСЗ) — одна из крупнейших международных ассоциаций, обслуживающих потребности профессионалов в области охраны труда и окружающей среды и техники безопасности, практикующих промышленную гигиену в промышленности, правительстве, труде, академических учреждениях и независимых организациях.
ПодробнееПросмотр: | Инфузория обувь | ||
Латинское название | |||
---|---|---|---|
Paramecium caudatum ehrhart | |||
|
Конец споров по поводу микроскопического обнаружения и воздействия чистых микропластиков в органах рыб
Под воздействием ветра, проливных дождей и приливных течений, загрязнение MP 12,66,67 распространилось на удаленные озера 19,68 , реки 14,21,69,70,71 , устьевые районы 72,73,74 , моря 41,75 , океаны 76 и даже морской лед 77 .В результате большое количество видов в настоящее время подвержены риску воздействия и восприимчивы к употреблению MPs 8,10,25,26,27,28 либо в результате воздействия с пищей, либо путем передачи по пищевой цепочке.
Преобладающими типами МП в водных системах являются волокна 14,15,16,44 , микрофрагменты 6,7,19,20 и микрогранулы 21 . В предыдущих исследованиях предполагалось, что тип МП 78,79 , а также форма 80 и размер влияют на уровень токсичности, оказываемой на ткани рыб.Чтобы воспроизвести эти наблюдения, в настоящем исследовании использовались различные типы (волокна, фрагменты и шарики), формы (неправильные и правильные) и размеры (1–255 мкм).
Острый эксперимент
Кормление
Danio rerio были предложены бесплатные MP для определения их способности распознавать пластмассы как несъедобные частицы, как ранее было предложено Kim et al. 81 После экспонирования все рыбы продемонстрировали явное поведение отказа, что позволяет предположить, что D.rerio сознательно признал пластик несъедобными частицами. Ким и др. . 81 детализировал, что случаи отлова в D. rerio имели самые низкие показатели, когда рыба подвергалась воздействию только МП. Большинство пластиковых частиц также было быстро отвергнуто в исследовании Колтона и др., . 82 Однако, несмотря на признание пластика несъедобным элементом, несколько авторов задокументировали присутствие МП в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ) рыб 83,84,85,86,87 .
Наблюдалось случайное поедание при кормлении скоплением добычи 46 . Кроме того, визуальные подсказки, напоминающие добычу, такие как цвет или форма, могут позволить проглотить более мелкие частицы, затрудняя различие между добычей и пластиковыми частицами 22,46,88 . Точно так же было высказано предположение, что запахи, связанные с биообрастающим пластиковым мусором, стимулируют поведение при поиске пищи 81,89 .
В нашем исследовании мы наблюдали, что свободные меньшие флуоресцентные МП иногда присутствовали в просвете кишечника.Похоже, что из-за их небольшого размера (1–5 мкм) эти флуоресцентные МП были случайно проглочены. Напротив, более крупные частицы косметических МП не наблюдались внутри кишечника D. rerio , и случайное проглатывание было исключено. Наши наблюдения, кажется, предполагают, что меньшие МП сложнее отличить от нормальной добычи, как ранее сообщалось Critchell & Hoogenboom 22 , и / или что МП с низкой плотностью меньшего размера с большей вероятностью будут пассивно проглочены при глотании воздуха 46 , 90 .
Когда MP смешивали с коммерческим кормом для рыб (диета F A ) и рыбьим жиром (диета C A ), частота приема внутрь значительно увеличивалась. Эти наблюдения подтверждают предыдущие сообщения о том, что химические сигналы напоминают добычу 89 и что более высокие концентрации в пище, вероятно, увеличивают потребление MP 46 .
Время удерживания в кишечнике, поглощение и выведение
Поглощение частиц МП наблюдали у D. rerio , получавших однократный прием пищи из рациона F A .Флуоресцентные микрошарики были обнаружены на апикальной и базальной поверхностях энтероцитов, внутри бокаловидных клеток и в собственной пластинке. Интернализация этих частиц была подтверждена сечениями Z-стека. Однако, несмотря на поглощение нескольких частиц, через 24 часа МП полностью очистились от ЖКТ D. rerio без транслокации в другие органы. О проникновении отдельных частиц (до ~ 70 мкм) в бокаловидные клетки сообщалось у других видов 91 .Эндоцитоз просветного материала бокаловидными клетками был описан 92 , и было высказано предположение, что некоторые субпопуляции бокаловидных клеток могут иметь относительно свободные соединения 93 . В исследовании Batel et al., . , поглощение нескольких частиц наблюдалось в 7,7% из D. rerio 24 . Однако дальнейших тестов для подтверждения интернализации частиц не проводилось. Кроме того, заболеваемость была очень низкой.
И наоборот, D.rerio , получавший однократный прием диеты C A , содержал пластиковые частицы только в просвете кишечника, и поглощения не наблюдалось. В этом случае поглощение микрофрагментов и микроволокон казалось маловероятным из-за их большого размера. Через 24 ч в задней части кишечника одного D. rerio осталось только микроволокно и микрофрагмент, что указывает на короткое время удерживания этих МП. Подобные наблюдения были описаны для C. auratus 45 и Cyprinodon variegatus 80 , подвергшихся воздействию частиц 5–200 мкм и 6–350 мкм соответственно.
В нашем исследовании показатели удержания депутатов и продуктов питания были схожими. Однако скорость удерживания флуоресцентных МП (1–5 мкм) была меньше, чем для косметических МП, так как через 24 часа все флуоресцентные частицы были полностью выведены из организма. Несмотря на их больший размер и неправильную форму, косметические микрофрагменты и микроволокна ПЭ были успешно удалены у большинства рыб через 24 часа. Показатели удержания депутатов в нашем исследовании были аналогичны показателям других авторов. Д.rerio быстро выводит из организма частицы MP (70 нм – 20 мкм), достигая устойчивого состояния через 48 часов после воздействия. 48 и C. auratus удаляет 90% частиц (50–500 мкм), к которым он экспонировалась через 33,4 часа 45 . Аналогичным образом, S. aurata показал степень удерживания, близкую к нулю, так как 90% рыбы очистили МП (~ 75 мкм) через 24 часа. 47 . Несмотря на сходство, для удаления более крупных частиц, вероятно, потребуется больше времени. Seriolella violacea , получавшим МП (длина 1,2 ± 0,2 мм; диаметр 1,0 ± 0,1 мм), потребовалось в среднем 10,6 ± 2,5 дня для выработки последних МП 46 . Кроме того, исследование Santos & Jobling, проведенное на Gadus morhua , получавшем один прием пищи с пластиковыми шариками (5000 мкм) и MP (2000 мкм), показало задержку эвакуации шариков 5000 мкм по сравнению со временем, которое потребовалось для напр., MPs 2000 мкм 94 .
Субхронический эксперимент
Выживаемость, прибавка в весе и пищевое поведение
После субхронического диетического воздействия МП выживаемость составила 100% во всех исследуемых группах.Для контрольной группы выживаемость составила 95,8%, так как одна рыба погибла в начале субхронического эксперимента. Наши результаты согласуются с предыдущими наблюдениями у D. rerio , подвергавшегося воздействию МП в течение двух 95 и 3 недель 48 . Напротив, значительное снижение выживаемости наблюдалось у D. rerio , которым вводили PP MP с концентрацией 10 мг / л; у рыб в этом эксперименте дополнительно наблюдалось вздутие живота 57 .
Не наблюдалось значительных различий в весе между тестовыми группами и контрольной группой.Аналогичные результаты были получены у Symphysodon aequifasciatus 96 и S. aurata , подвергнутых воздействию МП в течение 30 дней 97 и 45 дней 47 . Аналогичным образом, Acanthochromis polyaccantus , подвергнутый воздействию МП (средний диаметр 2 мм) в течение 42 дней, не показал значительных изменений в состоянии тела 22 .
После второй недели рыбы, получавшие диету C SC , проявляли тревожное поведение, такое как анорексия и летаргия, а также облегчение пигментации кожи.Сообщалось о снижении активности кормления и плавания у Sebastes schlegelii после воздействия PS MP 98 и Cyprinodon variegatus после воздействия нерегулярных PE MP 80 . Вялость и бледность могут быть вызваны несколькими факторами, такими как инфекции, токсичность, экологический стресс, кислородное голодание и голод 99 . Также была выдвинута гипотеза, что этот пониженный ответ возникает при многократном воздействии МП и может быть результатом привыкания к таким частицам 100 .Как и в другом исследовании с участием D. rerio , который кормили два раза в день науплиями, загруженными высокими концентрациями МП, не было никаких наблюдаемых признаков стресса или заболевания. Однако в этом случае 24 проглоченные частицы были относительно небольшими (1–20 мкм), что могло объяснить отсутствие признаков дистресса после приема нескольких приемов пищи с МП.
Удержание и перемещение частиц
Для рациона F SC флуоресцентные МП составляли 0,1% от общего потребляемого корма, аналогично оценкам Jovanović et al. 47 Для диеты C SC средняя плотность использованных МП составляла 2137 шт. / М 3 (2,49 частиц / л). Несмотря на очевидное большое количество используемых предметов MP, аналогичные или даже более высокие значения были зарегистрированы в водной среде 17,69,101 .
Кроме того, сообщалось, что большинство подходов к оценке количества МП в водных экосистемах приводят к недооценке 23 . Общей проблемой большинства полевых исследований является то, что в каждом исследовании используются разные размеры ячеек, таким образом, имея разный размер отсечения для анализируемых депутатов 23,102 .
После последовательных приемов пищи на диете F SC с последующим периодом очищения, D. rerio удалил проглоченные частицы, поскольку после периода очищения не было обнаружено следов частиц в кишечном тракте. Напротив, 50% рыб, получавших последовательные порции рациона C SC , сохраняли в среднем 3,3 частицы / рыбу после окончания эксперимента. Количество частиц, обнаруженных в кишечнике после многократного приема пищи, согласуется с данными, обнаруженными в полевых исследованиях, в которых в среднем от 0 до 3 частиц 34,36,37,38,39,40,41,42,43,44 был задокументирован.Низкое количество частиц, обнаруженных в пищеварительном тракте, может указывать на короткое время пребывания МП в ЖКТ рыб. Эти результаты также, по-видимому, указывают на то, что MP вряд ли будут накапливаться в кишечнике рыбы в течение последовательных приемов пищи . Однако размер частиц, несомненно, является определяющим фактором при рассмотрении степени зазора для пластиковых частиц. G. morhua , получавший несколько приемов пищи, показал более длительную степень удерживания, поскольку период полужизни гранул в желудке существенно увеличивался с размером частиц 94 .Наши результаты подтверждают наблюдения Сантоса и Джоблинга 94 о том, что уровень удержания MP увеличивается с увеличением размера частиц и потреблением дополнительных приемов пищи.
Тем не менее, важно иметь в виду, что структура пищеварительного тракта варьируется у разных видов рыб 49 . Кроме того, при обсуждении моделей скорости выведения следует принимать во внимание другие внутренние (например, генетический фон, вид, возраст и физиология) и внешние (например, среда обитания, еда, тип МП и методология).
В нашем исследовании после последовательных приемов пищи на диете F SC в печени наблюдалось в среднем 1,6 частиц на рыбу. Чтобы подтвердить процесс транслокации, интернализация этих частиц (до 1,634 мкм) была подтверждена несколькими срезами Z-стека. Транслокация MP-частиц в другие ткани, такие как печень 47,50,51 и мышца 37,47 , была описана ранее. Авио и др., . сообщил о перемещении пластиковых частиц (200-600 мкм) из пищеварительного тракта в печень в M.cephalus 50 . Аналогичным образом, Collard et al. документально подтвердили присутствие двух частиц (39–90 мкм) в печени E. encrasicolus 51 и Abbasi et al . подробно описал присутствие MP-частиц различного размера (до 250 мкм) в печени четырех видов рыб, пойманных в Персидском заливе. 37 . Точно так же Йованович и др. . наблюдал присутствие <1 частицы (214 ± 288 мкм) в печени S. aurata 47 , тщательно указывая на возможность перекрестного заражения.Предполагаемую транслокацию таких больших частиц трудно объяснить современными знаниями о путях транслокации MPs у рыб; таким образом, правдоподобность этих отчетов должна быть поставлена под сомнение.
Другие исследования, работающие с более мелкими частицами, также сообщили о транслокации МП в печень 48,52 . Исследование, в котором O. niloticus подвергалось воздействию MP 0,5 мкм, предположительно наблюдало транслокацию MP в печень 52 ; однако микрофотографии, использованные для подтверждения этих наблюдений, практически не показывают флуоресценции в печени, а флуоресценция в остальных органах диффузно распространяется по тканям.Вероятно, это связано с выщелачиванием флуоресцентного красителя и не обязательно с присутствием MP-частиц 53 . В другом исследовании с участием D. rerio с использованием 5 мкм МП 48 микрофотографии были неточными или плохо представлены, как ранее подчеркивалось в другой публикации 54 .
Как ранее заявили Йованович и др. . 47 , сообщения о транслокации MPs через кишечник рыб следует рассматривать с осторожностью, поскольку механизмы прохождения пластического материала за пределы ЖКТ рыб еще не определены.Было предложено два основных пути транслокации: трансцеллюлярный и параклеточный 18,103 . Трансклеточный путь включает абсорбцию через микроворсинки в кровь 93,103 , в то время как параклеточный путь происходит через плотные соединения между клетками в кровь 104 . У млекопитающих трансцеллюлярное поглощение происходит в основном через М-клетки в пейеровских бляшках и кишечной лимфоидной ткани (GALT) 105,106 . У рыб нет организованного GALT, но вместо этого есть лимфоидные клетки, разбросанные по эпителию и собственной пластинке, а иногда и макрофаги.До недавнего времени считалось, что у рыб нет М-клеток 107 . Однако недавние исследования на лососевых 108 и D. rerio 109 идентифицировали специализированные энтероциты с М-клеточной активностью в задней части средней кишки. У рыб эти части средней кишки являются основными местами захвата макромолекул и их переноса в тесно связанные внутриэпителиальные макрофаги 109 . У D. rerio , эти клетки идентифицируются по наличию больших надъядерных вакуолей 109 , и было высказано предположение, что эти вакуолизированные клетки доставляют содержимое просвета к рассеянным иммунным клеткам, находящимся под эпителиальным слоем 110 . Однако фагоцитарная активность не ограничивается этими клетками и также была обнаружена в обычных энтероцитах 109 . Парацеллюлярный проход твердых частиц через промежутки между энтероцитами в систему кровообращения был предложен как наиболее вероятный путь для МП, из-за диапазона размеров, который они покрывают 18 . В случаях сильного воспаления и эрозии прохождение частиц через поврежденную ткань, по-видимому, облегчается 104,111 .
MP могут попадать в систему кровообращения любым из этих путей и достигать синусоидов через эндотелиальные отверстия и пространство Диссе.Отсюда захват может происходить через базальную мембрану гепатоцитов 112 . Фенестры различаются по размеру в зависимости от физиологических и патологических состояний, контролируя то, что входит в пространство Диссе или выходит из него, и какие гепатоциты подвергаются воздействию 113 . Латексные шарики размером 1 мкм и 100 нм наблюдались в синусоидах печени как у молодых, так и у взрослых особей D. rerio 113 .
Насколько нам известно, наше исследование является первым, подтверждающим интернализацию MP-частиц в печени, тем самым подтверждая транслокацию MP-частиц.В настоящем исследовании транслокация частиц была ограничена печенью, так как никакие другие органы или ткани не показали присутствия MPs, несмотря на то, что другие авторы описали транслокацию в мышцу 37,47 .
Гистопатологические изменения
Пищеварительный тракт рыб является продолжением внешней среды, действуя как важный интерфейс между внутренней и внешней средами 49 и, следовательно, считается основным путем воздействия МП.По этой причине образцы кишечника оценивались в соответствии с рекомендациями, описанными Saraiva et al. 62 .
Наши наблюдения показали отсутствие значительных повреждений у D. rerio из обеих групп лечения после субхронического диетического воздействия. Аналогичные результаты были получены для S. aurata 47 и Oncorhynchus mykiss 58 , получавших различные типы нетронутых МП (0,1 г / кг массы тела / день) в течение 45 дней и подвергавшихся воздействию как нетронутых, так и применяемых в окружающей среде МП. (10 мг / рыба / день) в течение 4 недель.Точно так же Barbodes gonionotus , подвергнутые воздействию фрагментов ПВХ (0,2, 0,5 и 1,0 мг / л) в течение 96 часов, не вызвали явного повреждения ткани. 114 .
Тем не менее, после исчерпывающего обзора опубликованной научной литературы о влиянии чистых МП на кишечник рыб мы поняли, что в большинстве публикаций представлены отчетливые результаты. Предыдущие гистологические изменения кишечника, о которых сообщалось у рыб, подвергшихся воздействию первичных МП, включали дефекты ресничек у взрослых особей D. rerio 79 .Поскольку ресничные клетки обнаруживаются только в кишечном эпителии миног, хондростей и дипноидов, а также на ранних стадиях жизни у некоторых костистых рыб 115 , они не присутствуют в слизистой оболочке кишечника большинства видов рыб (например, D. rerio) . В большинстве случаев у рыб вместо микроворсинок щеточной каймы 115 , выстланных слоями воды и слизи 49 .
Регрессивные изменения, такие как эрозия и / или изъязвление 78 слизистой оболочки, были зарегистрированы под следующими синонимами: повреждение эпителия и ворсинок 56 , растрескивание ворсинок, расщепление энтероцитов 57 или разрыв эпителий 78 .Однако к таким наблюдениям следует относиться с осторожностью, так как эрозии и особенно язвы часто сопровождаются некрозом или кровотечением слизистой оболочки 116 ; эти изменения не видны на микрофотографиях, предоставленных ни одним из вышеупомянутых авторов. Утверждается, что наблюдалось отслоение эпителия от собственной пластинки (lamina propria) 55,78,117,118 . Однако микрофотографии, приведенные для подтверждения этих наблюдений, показывают разделение между эпителием слизистой оболочки и собственной пластинкой, что является обычным артефактом препарирования.Другие находки, описанные как укорочение и слияние складок слизистой оболочки, также были задокументированы 55 . Несмотря на то, что стойкое токсическое повреждение слизистой оболочки кишечника и хроническое воспаление могут вызывать морфологические изменения кишечных складок, такие как атрофия и слияние соседних складок, иллюзорное появление этих повреждений на поперечных срезах также может быть вызвано артефактами плоскости сечения. 64 . Это, по-видимому, имеет место в вышеупомянутом исследовании 55 .Сообщалось также об обезглавливании ворсинок 55 . Важно помнить, что обследование кишечника может быть проблематичным, поскольку артефакты из-за автолиза возникают быстро 119 . Автолиз кончиков складок слизистой оболочки является частым артефактом и часто возникает, когда рыба фиксируется целиком 72 . Таким образом, следует с осторожностью приписывать патологическое значение аутолитическим изменениям 72 .
Описана вакуолизация энтероцитов 55,79,117 .Однако при оценке вакуолизации энтероцитов у некоторых видов рыб (например, D. rerio ) необходимо учитывать наличие специализированных энтероцитов в заднем сегменте средней кишки с выступающими надъядерными вакуолями 120 . Предыдущее исследование 79 охарактеризовало вакуолизацию того, что выглядит как нормальный энтероцит в заднем сегменте средней кишки, как патологическое изменение.
Что касается прогрессивных изменений, в нашем исследовании количество и размер бокаловидных клеток не показали значительных различий между тестируемыми группами.Аналогичным образом, исследование, проведенное на Onchorhyncus mykiss , получавших PS MP, не показало значительных изменений в количестве наблюдаемых бокаловидных клеток 58 . Хотя в предыдущих исследованиях 95,118 упоминалась гиперсекреция слизистой , , ни одна из представленных микрофотографий не показала значительного присутствия слизистой секреции. В обоих случаях авторы указали на бокаловидные клетки, но гиперсекреция слизистой не была очевидна. Также известно, что толщина слизистого слоя меняется в зависимости от региона, обычно она больше в дистальных отделах кишечника 121 .Сообщалось также о гиперплазии 55,117 и гипертрофии бокаловидных клеток 78 . Гиперплазия слизистых клеток обычно связана с источниками стойкого раздражения, такими как паразитизм 122 и диета 119 . С другой стороны, сообщалось об уменьшении объема слизи 79 и уменьшении количества бокаловидных клеток 118 . Бокаловидные клетки, как известно, различаются по длине кишечника 121 , и у многих видов костистых клеток задняя часть кишечника содержит самую высокую концентрацию бокаловидных клеток 123 .Также было показано, что голодание снижает массу слизистой оболочки кишечника 124 . Еще одним зарегистрированным открытием была гиперплазия стержневых клеток 55 . Однако имеющиеся микрофотографии не дали никаких доказательств гиперплазии, поскольку стержневые клетки могут быть обнаружены в небольших количествах в здоровых тканях. Кроме того, следует проявлять осторожность при приписывании патологического значения присутствию или численности этих клеток, поскольку не было установлено последовательной связи между количеством стержневых клеток и заболеванием 64 .
В настоящем исследовании воспаления не наблюдалось. Рассеянные лимфоциты присутствовали в собственной пластинке; однако они считались частью нормальной лимфоидной ткани. Воспалительные изменения 56,78 , а также наличие нейтрофилов в слизистой оболочке кишечника 118 и тучных клеток у основания эпителия 79 наблюдали и другие авторы. Однако эти наблюдения не видны на имеющихся микрофотографиях. Присутствие нескольких лейкоцитов само по себе не обязательно означает патологию и / или воспаление.У здоровых рыб существует постоянная популяция лейкоцитов, таких как тучные клетки / эозинофильные гранулярные клетки (EGC), и лимфоциты, разбросанные по собственной пластинке 62 .
Благодаря большому кровоснабжению и заметной метаболической способности печень является органом-мишенью для токсикантов 112 , а также предоставляет соответствующую информацию об общем состоянии здоровья и выявляет наличие субклинических фоновых заболеваний 65 . В настоящем исследовании образцы печени оценивались отдельно в зависимости от пола рыб в соответствии с протоколом, предложенным Bernet et al . 63 Специфические половые различия характерны для взрослых особей D. rerio . У репродуктивно активных взрослых яйцекладущих самок повышенная регуляция синтеза белка яичного желтка вителлогенина часто приводит к тому, что цитоплазма гепатоцитов имеет пестрый, базофильный вид с спавшимися синусоидами из-за увеличения гепатоцитов 64,124 . Напротив, печень репродуктивно активных мужчин имеет круглые эозинофильные гепатоциты с прозрачными вакуолями, содержащими слегка хлопьевидный материал и минимальное смещение ядра, что соответствует гликогену 124 .
В целом, в нашем исследовании не было отмечено никаких изменений кровообращения, пролиферации, воспаления или опухолей. После тщательного изучения научной литературы о влиянии чистых МП на печень рыб мы обнаружили, что наши результаты противоречат результатам предыдущих исследований, предполагая возникновение нескольких изменений как следствие воздействия МП.
Сообщалось об изменениях кровообращения, а именно застойных явлениях и гиперемии 78,117 и кровотечениях 125 .В конкретном случае 78 обнаружение, описанное как застой, вероятно, является внутрисосудистой эозинофильной белковой жидкостью. Подобные результаты были задокументированы van der Ven et al . 126 , которые идентифицировали эти изменения как накопление вителлогенина в сосудах. Однако пол животных, использованный Jabeen et al., . 78 не разглашается, и дальнейшие выводы сделать нельзя. В целом, при оценке застойных явлений в печени и расширенных синусоидов важно помнить о степени обескровливания рыбы при умерщвлении и о степени осторожности, чтобы не сдавить образец печени вручную при аутопсии 64 .Кровоизлияние в печень 125 , по-видимому, характеризуется небольшим количеством эритроцитов в синусоидах, которые, вероятно, были разорваны во время микротомии. Сообщения о скоплении или расширенных синусоидах часто являются артефактами сбора, сохранения или обработки тканей 65 .
Что касается регрессивных изменений в нашем исследовании, у 22,2% (4/18) женщин наблюдалась вакуолизация от минимальной до легкой (баллы: 1-2), в то время как у 27,8% (5/18) наблюдалась умеренная вакуоляция (балл: 4). . Дополнительно 27.8% (5/18) мужчин демонстрировали как минимальную, так и легкую вакуоляцию (оценка: 1-2). Уменьшение вакуолизации у обоих полов оказалось зависимым от времени. Истощение гликогена было аналогично описано у Oryzias latipes , подвергнутых воздействию чистых MP 127 . Нарушение гепатоцеллюлярной вакуолизации — обычная реакция печени рыб на токсичность 128 . Кроме того, это неспецифическая находка, которая может возникать как прямой эффект интоксикации или вторичная по отношению к ухудшению физического состояния, вызванному истощением, стрессом или сопутствующим заболеванием 64,124 .В нашем случае вакуолизация не была достоверно коррелирована с массой рыбы, и сопутствующие заболевания не были идентифицированы. Мы полагали, что потеря гепатоцеллюлярной вакуолизации могла быть вызвана стрессом или даже длительным воздействием МП. Как ни парадоксально, токсическое воздействие может также привести к накоплению липидов или гликогена в печени 124 .
Повышенная гепатоцеллюлярная вакуолизация 117 и набухание вакуолей 129 у рыб, подвергшихся воздействию чистых МП, также сообщалось другими авторами.Однако следует проявлять осторожность, прежде чем рассматривать повышенную гепатоцеллюлярную вакуолизацию как патологическое изменение, так как это также может быть результатом перекармливания чрезмерно калорийной диеты или перекисного окисления липидов 124 . Было высказано предположение, что морские костистые животные, содержащиеся в неволе, могут быть особенно предрасположены к липидозу печени, как это наблюдалось в исследовании D. labrax , использованном в исследовании с MP 90
7 , из-за сниженной способности к пролиферации пероксисом гепатоцитов в сочетании с искусственным кормлением. с высоким содержанием мононенасыщенных жирных кислот 124 .Перекисное окисление липидов у рыб также может быть вызвано токсичными веществами 65,124 . В другом исследовании 48 сообщалось о липидных каплях в гепатоцитах. Однако дальнейшие гистохимические методы не были выполнены для подтверждения липидного происхождения вакуолизации. Кроме того, из-за артефактов на контрольной микрофотографии трудно провести сравнение между контрольной и тестовой группами для выявления возможного увеличения гепатоцеллюлярной вакуолизации. Помимо вакуолизации липидов и гликогена, существуют и другие потенциальные причины гепатоцеллюлярного увеличения, такие как вакуолярное набухание цистерн эндоплазматического ретикулума (гидропическая дегенерация) 124 .Вакуолярное набухание и гидропическая дегенерация якобы наблюдались в другом исследовании 78 . При сравнении микрофотографий контрольной и тестовой групп можно заметить, что клетки, предназначенные для иллюстрации гидропической дегенерации, также присутствуют на микрофотографии контрольной группы. Поскольку увеличение между изображениями различается, возникает иллюзия более крупных вакуолей на микрофотографии тестовой группы. То же самое относится и к зарегистрированному вакуумному набуханию.Некроз также наблюдался в печени рыб, подвергшихся воздействию МП 48,117,125 .В одном исследовании 125 некроз, вероятно, был вызван травмой при обращении. Чистые пространства без ткани с большей вероятностью могут быть артефактами в результате очаговой травмы во время сбора ткани. В других экспериментах 48,125 не было доказательств некроза. Результаты, классифицируемые как гепатоцеллюлярный некроз или апоптоз, должны отражать цитоплазматическую гиперэозинофилию с конденсацией или без нее; неправильные или округлые края цитоплазмы; ядерные изменения, такие как пикноз, кариорексис или кариолизис; фагоцитоз некротических клеток или апоптотических телец; а в случае некроза — потенциальная воспалительная реакция 65 .Поврежденные и агрегированные ядра были зарегистрированы 129 . Однако это, вероятно, разрастание агрегатов макрофагов. Голод, старение, инфекционные заболевания и токсины могут вызывать пролиферацию агрегатов макрофагов 124 .
Среди прогрессирующих изменений были отмечены изменения морфологии и гипертрофии гепатоцитов 117 . Часто, когда повышенная вакуолизация приводит к увеличению цитоплазмы, это путают с гепатоцеллюлярной гипертрофией 65 .Однако гепатоцеллюлярная гипертрофия должна быть зарезервирована для описания невакуолизированных клеток, которые увеличиваются в результате индукции метаболических ферментов, что приводит к усилению регуляции органелл 65 . Кроме того, гипертрофия гепатоцитов по физиологическим или токсикологическим причинам часто сопровождается базофилией 124 .
Описано также воспаление 48,78 . В первом исследовании 48 признаки воспаления не были очевидны ни на одной из предоставленных микрофотографий.В свою очередь, микрофотографии, представленные во втором исследовании 78 , по-видимому, идентифицировали трубчатую структуру, вероятно, часть билиарной системы 130 или, что менее вероятно, сосудистую структуру нормальной стромы печени. Несмотря на то, что на рисунке 78 может быть несколько лейкоцитов, редкие лейкоциты не обязательно означают воспаление. При оценке воспаления в печени необходимо учитывать, что кроветворная ткань может присутствовать в перипортальных областях печени у некоторых видов рыб 131 и что неотъемлемым компонентом воспаления является инфильтрация нерезидентных лейкоцитов в пострадавший сайт 65 .
Особый архитектурный дизайн печени рыб, имеющий только базальные и базолатеральные аспекты гепатоцитов, непосредственно подвергающихся синусоидальной перфузии, препятствует поглощению химических веществ гепатоцитами рыб 124 . Это, а также более низкая скорость перфузии могут помочь объяснить относительную толерантность рыб к МП.
Наши результаты показывают, что особей D. rerio распознают частицы пластика как несъедобный материал, но проглатывают их либо при смешивании с пищей или рыбьим жиром, либо случайно при контакте с относительно небольшими пластиковыми частицами (1–5 мкм).Проглоченные мелкие пластиковые микрогранулы (1–5 мкм) и средние микрофрагменты PE (120–255 мкм) и волокна (средняя ширина и длина 13,67 мкм и 1,5 мм соответственно) вряд ли будут накапливаться в пищеварительном тракте D. rerio после одного или нескольких приемов пищи, так как МП были почти полностью эвакуированы через 24 часа, и только несколько частиц остались в пищеварительном тракте после субхронического приема внутрь. Никаких смертей или значительного воздействия на состояние тела не было выявлено после 45 дней кормления МП.Однако у рыб, которых кормили средними, нерегулярными PE MP, наблюдались анорексия и летаргия. Сообщалось, что проглатывание частиц вызывает физическую закупорку кишечника, вызывая ложное чувство сытости и препятствуя кормлению 23,34 . В данном случае считается, что относительно большие частицы нарушают подачу.
Насколько нам известно, это первое исследование, полностью демонстрирующее захват и перемещение пластиковых микрогранул в печень с помощью конфокальной микроскопии.Однако точный путь, по которому MP достигают печени, все еще неизвестен, и необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить механизмы, которые позволяют захватывать и перемещать MPs.
После субхронического воздействия диеты на нетронутые МП у D. rerio не было обнаружено каких-либо гистологических повреждений в наблюдаемых органах. Наши результаты контрастируют с большей частью научной литературы о влиянии МП на рыбу. На различия могут влиять несколько элементов, таких как вид, возраст, пол, репродуктивный статус рыб, окружающая среда, проверенные концентрации, размер, тип, химический состав поверхности и гидрофобность МП, режим кормления, путь воздействия, время воздействия, количество животных и повторы для каждой экспериментальной группы, методы сбора и подготовки образцов 65 .Однако неточность в интерпретации результатов гистопатологического исследования может быть основной причиной несоответствия, наблюдаемого в результатах, касающихся воздействия чистых МП на рыбу. В письме 54 , написанном несколькими ветеринарными патологами, подчеркивается обеспокоенность повторяющейся проблемой неточных гистопатологических данных, которая все чаще встречается в научных публикациях . Эта ситуация вызывает особую тревогу в случаях, когда выводы исследования сильно зависят от гистопатологических результатов.Кроме того, такие наблюдения сохранятся в литературе и послужат поводом для дальнейших ошибочных исследований, что особенно проблематично для студентов и исследователей, занимающихся патологией рыб, которые рассчитывают найти надежные источники информации в этих же публикациях.
Хотя нетронутые МП сами по себе, по всей видимости, не вызывают неминуемых повреждений, большая часть производимых пластмасс не целиком состоит из пластиковых полимеров. При производстве пластмасс в них вводятся эндогенные химические добавки 18 .MP также очень эффективно адсорбирует стойкие органические загрязнители, уже присутствующие в воде 23 . Следовательно, необходимы дальнейшие исследования для правильного определения воздействия ЛП и связанных с ними контаминантов на здоровье животных и, как следствие, здоровье населения.
Структура, функция и динамика поверхности слияния фузогена гамет HAP2
Теперь мы обсуждаем доказательства, которые предполагают, что наша кристаллическая структура HAP2 является промежуточным состоянием, и что в состоянии, определяемом мутагенезом, петли слияния сливаются на 3-кратной оси тримера, чтобы сформировать большую объединенную поверхность слияния.Согласно современным моделям конформационного изменения слитых белков вирусов класса II, тримеры проходят через структуры состояний раннего и позднего слияния на пути к слиянию мембран (Harrison, 2015; Klein et al., 2013). Поворот на интерфейсе D1-D2.1 хорошо описан в литературе как между структурами состояний слияния, так и между структурами состояний до слияния и слияния. В пользу континуума в ориентации D2 или D2.2 особенно хорошо говорят: Dengue 1 , клещевой энцефалит и St.Луи-энцефалит флавивирусных фузогенов. Их структуры слитого состояния показывают по существу идентичные конформации в D1 и D3; напротив, ориентация D2 заметно различается (рис. 5 и 6). Таким образом, петли слияния Dengue 1 находятся в симметричном тесном контакте Ван-дер-Ваальса на 3-кратной оси (Nayak et al., 2009), петли слияния клещевого энцефалита s находятся в асимметричном, менее тесном контакте (Bressanelli et al., 2004) и Сент-Луисский энцефалит петли слияния расположены дистальнее 3-кратной оси (Luca et al., 2013). Примечательно, что эти фузогены идентичны друг другу по последовательности на 36, 42 и 49% и имеют идентичные остатки петли слияния. Поскольку эти флавивирусные фузогены тесно связаны по последовательности и функциям, разумно предположить, что каждый из них проходит через континуум конформаций, подобных тем, которые демонстрирует весь набор структур. Мы думаем об этих фузогенах флавивирусов как о гомологах одного и того же белка у разных видов, точно так же, как мы думаем о HAP2 как об одном и том же белке у разных видов; действительно, эти флавивирусные фузогены гораздо более тесно связаны друг с другом, чем фузогены HAP2 от разных видов, которые демонстрируют только 12-35% идентичности последовательностей для представителей на (Рисунок 3 — рисунки, дополнения 1 и 2) и сильно различаются по своему слиянию. петли.Таким образом, кристаллические структуры в состоянии слияния флавивирусов, по-видимому, представляют разные кадры в фильме, который одинаково воспроизводится для всех фузогенов флавивирусов и, соответственно, для других структурно и функционально гомологичных слитых белков класса II, таких как HAP2.
Наш анализ in vivo мутантов HAP2 Chlamydomonas показал, что гидрофобные остатки в петлях слияния важны во время реакции слияния, что согласуется с ролью во взаимодействии с мембраной гамет плюс .Более того, три топографически различных набора слитых остатков в каждом мономере HAP2 предоставили уникальную возможность проверить их относительную важность как в состоянии предварительного слияния HAP2 на покоящихся гаметах, так и во время процесса слияния как такового. Ни одна из мутаций в спиралях петли слияния не оказывала заметного влияния на экспрессию или локализацию HAP2 в покоящихся гаметах, что указывает на то, что эти остатки имеют небольшую функцию, если вообще выполняют какую-либо функцию до начала реакции слияния. С другой стороны, мутации остатков в α1- и α2-спиралях снижали эффективность слияния в 50-100 раз, в то время как мутации в η1-спирали снижали эффективность слияния только в 2 раза.Предыдущая мутация η1-спирали дала идентичные результаты (Fédry et al., 2017). Примечательно, что мутации идентичных остатков Phe и Trp в α1- и η1-спиралях дали заметно разные результаты, показывая, что различия в расположении, а не в характере мутировавших остатков, были ответственны за различия в фенотипах.
Несколько моделей потенциально могут объяснить наши общие выводы. Одна модель предполагает, что текущая кристаллическая структура обеспечивает слияние, и что каждый мономерный D2.2 независимо связывается с целевой мембраной. Другая модель, предложенная с вирусным фузогеном, расширенным больше, чем здесь, заключается в том, что расширенные тримеры могут ассоциироваться латерально с образованием розеток, в которых внешние грани D2.2 ассоциируются с образованием ассоциаций тример-тример (Gibbons et al., 2004). Третья модель предполагает, что в состоянии окончательного слияния внутренняя 3-х осевая проксимальная поверхность D2.2 сходится на 3-х кратной оси, как видно на Dengue (Harrison, 2015; Nayak et al., 2009; Klein и другие., 2013). Процесс слияния очень кооперативен, и поэтому все модели постулируют, что для слияния требуется несколько тримеров, расположенных поблизости друг от друга.
Мы тестируем эти модели, используя концепцию структурной биологии, в которой было обнаружено, что наиболее важные остатки для взаимодействия белков расположены преимущественно вблизи центра поверхностей взаимодействия, то есть в горячих точках (Clackson and Wells, 1995; Bogan and Thorn, 1998). ). В модели, в которой достаточно мономеров, петли слияния в каждом мономере отделены друг от друга растворителем и функционируют независимо друг от друга.В мономерах наименее важная спираль η1 находится между наиболее важными α1- и α2-спиралями; следовательно, модель горячей точки не согласуется с мономерами, функционирующими отдельно в состоянии, наиболее мутационно важном для слияния. В модели, в которой тримеры ассоциируются латерально в розетки, ассоциация происходит через поверхность мономера, дистальнее 3-кратной оси, которая несет спираль η1 (Gibbons et al., 2004). Эта спираль наименее важна для слияния, и поэтому ассоциация через розетки в состоянии, определяемом мутагенезом, не согласуется с концепцией горячих точек.В модели, в которой мономеры сближаются по 3-кратной оси, α1- и α2-спирали на соседних мономерах будут сближаться друг с другом и будут центральными на поверхности слияния, в то время как η1-спираль будет на периферии. Единая тримерная поверхность слияния согласуется с моделью горячей точки, поскольку α1- и α2-спирали в центре поверхности взаимодействия с мембраной критически важны для слияния, в то время как η1-спираль на внешней периферии границы раздела имеет незначительное значение. . Таким образом, в наиболее мутационно важном состоянии для слияния концепция горячих точек выступает против того, чтобы мономеры раздвигались и действовали независимо или объединялись в розетки, и выступает за слияние мономеров на оси трех частей в единую поверхность слияния.Таким образом, результаты мутаций предполагают, что наша кристаллическая структура не представляет конечное состояние слияния HAP2 во время реакции слияния, а вместо этого представляет собой один кадр в фильме модели конформационных изменений HAP2 во время процесса слияния гамет.
Наши результаты не оспаривают роль во время многоступенчатого процесса слияния взаимодействия расширенных тримеров или розеток расширенных тримеров с целевой мембраной. Вместо этого результаты свидетельствуют в пользу приближения α1 и α2-спиралей к 3-кратной оси в состоянии, которое наиболее критично для слияния мембран, которое, вероятно, соответствует переходному состоянию для слияния мембран.Переходные состояния по определению являются состояниями с наивысшей энергией во время процессов реакции и, следовательно, состояниями, наиболее нуждающимися в структурной стабилизации. Соответственно, мы предполагаем, что переходное состояние является наиболее чувствительным к мутации, и поэтому поверхности слияния каждого мономера перемещаются по направлению к 3-кратной оси, чтобы сформировать единую большую поверхность слияния в конечном состоянии для слияния мембран, что могло бы также вероятно состояние, в котором петли слияния наиболее глубоко погружены в мембрану.
Наши структурные и динамические исследования HAP2 и анализ структур состояний слияния флавивирусов обеспечивают вероятные пути, с помощью которых D2.2 в каждом мономере может приближаться к 3-кратной оси, чтобы сформировать общую поверхность слияния. От рисунка 6B до рисунка 6C петли слияния флавивирусов в каждом мономере перемещаются против часовой стрелки на 11 Å по Phe108 и, как закрывающаяся радужная оболочка, приближаются на 8,5 Å к оси 3-го порядка и к контакту Ван-дер-Ваальса. Это движение достигается за счет наклона на стыке D1 — D2.1 (рис. 5E, F).Каркас D2.2 в нашей структуре HAP2 находится на таком же расстоянии от 3-кратной оси и имеет такой же наклон D1-D2.1, что и более дистальная флавивирусная структура (рис. 5B, F), что приводит к аналогичным положениям в 5 часов петель слияния зеленого мономера на рис. 6A, B. Подобное движение на стыке D1-D2.1 в HAP2 является правдоподобным, что приблизит петли слияния зеленых мономеров на рисунке 6A к оси 3-го порядка и к положению на 3 часа, как показано на рисунке 6C. Обратите внимание, что при движении радужной оболочки W101 у флавивирусных фузогенов остается дистальнее 3-кратной оси (Рис. 6B, C), как и η1-спираль в HAP2 (Рис. 6A).HAP2 и флавивирусные фузогены также обнаруживают наклон на стыке D2.1-D2.2 (Figure 5A-D). Более того, сравнение кристаллической структуры показывает, и HDX предполагает, что петли слияния HAP2 могут качаться в карбонильной клетке. Мы ожидаем, что наклон на стыке D1-D2.1, приводящий к радужно-подобному движению петель слияния, наклон на стыке D2.1-D2.2 и раскачивание петель слияния в карбонильной клетке может все способствовать подходу к 3-кратная ось петель слияния в HAP2. Ориентация по отношению к 3-кратной оси трех несущих гидрофобные остатки спиралей в каждом мономере HAP2, вероятно, мало изменится во время движения к 3-кратной оси, как это видно у фузогенов флавивируса.Α1-спираль одного мономера будет контактировать с α2-спиралью своего соседа, тогда как η1-спираль будет формировать внешний край по периметру объединенной поверхности слияния тримеров.
Петли слияния HAP2 и сравнение с радужно-подобными движениями петель слияния флавивирусов.
( A ) Текущая структура HAP2.Фузогены флавивируса B и C. из вирусов энцефалита Сент-Луиса, ( B ) и вирусов денге 1 ( C ). Тримеры были наложены на общую 3-кратную ось с использованием D1, и эквивалентные мономеры окрашены одинаково. Штрихами показаны расстояния в одном мономере от атомов Cβ указанных остатков петли слияния до 3-кратной оси, а также в ( B и C ) расстояния между атомами Cβ в двух флавивирусных структурах слияния. От ( B до C ), наклон в D1 — D2.1 соединение, показанное на фиг. 5, приводит к подобному радужной оболочке движению петель слияния в направлении против часовой стрелки и проксимальном к оси направлении.
https://doi.org/10.7554/eLife.39772.015Итак, наша структура тримера эктодомена Chlamydomonas HAP2 показывает, что гидрофобные остатки в петлях слияния этого слитого класса II выступают апикально из трех спиралей на конце D2.2. С точки зрения модели горячих точек для белковых взаимодействий, расширение петель слияния от 3-кратной оси тримера наряду с меньшей важностью самой дистальной η1-спирали делают вероятным, что наша структура не является окончательной состояние слияния HAP2.Скорее, гибкость в D2, выявленная динамикой белка с использованием HDX, наряду со сравнениями между структурами HAP2 и фузогенами флавивирусов, приводит к модели, согласно которой петли слияния HAP2 в каждом мономере сливаются вместе, образуя более крупную унифицированную поверхность слияния на заключительных этапах механизма слияния. .
% PDF-1.3 % 465 0 obj> эндобдж xref 465 328 0000000016 00000 н. 0000008563 00000 н. 0000008723 00000 н. 0000008784 00000 н. 0000008912 00000 н. 0000009248 00000 п. 0000009516 00000 н. 0000009566 00000 н. 0000009602 00000 н. 0000019038 00000 п. 0000019568 00000 п. 0000020646 00000 п. 0000021168 00000 п. 0000021678 00000 п. 0000025881 00000 п. 0000026199 00000 п. 0000026721 00000 п. 0000037346 00000 п. 0000037900 00000 п. 0000163611 00000 н. 0000166281 00000 н. 0000173873 00000 н. 0000174800 00000 н. 0000175128 00000 н. 0000175215 00000 н. 0000175565 00000 н. 0000175696 00000 н. 0000176835 00000 н. 0000177067 00000 н. 0000177405 00000 н. 0000177506 00000 н. 0000177846 00000 н. 0000177951 00000 н. 0000178026 00000 н. 0000178108 00000 н. 0000178179 00000 н. 0000178260 00000 н. 0000178342 00000 н. 0000178390 00000 н. 0000178485 00000 н. 0000178533 00000 н. 0000178660 00000 н. 0000178739 00000 н. 0000178787 00000 н. 0000178876 00000 н. 0000179000 00000 н. 0000179048 00000 н. 0000179145 00000 н. 0000179193 00000 н. 0000179288 00000 н. 0000179336 00000 н. 0000179470 00000 н. 0000179544 00000 н. 0000179592 00000 н. 0000179668 00000 н. 0000179792 00000 н. 0000179873 00000 н. 0000179921 00000 н. 0000179997 00000 н. 0000180132 00000 н. 0000180217 00000 н. 0000180265 00000 н. 0000180341 00000 п. 0000180468 00000 н. 0000180543 00000 н. 0000180591 00000 н. 0000180667 00000 н. 0000180795 00000 н. 0000180870 00000 н. 0000180918 00000 н. 0000180994 00000 н. 0000181121 00000 н. 0000181196 00000 н. 0000181244 00000 н. 0000181320 00000 н. 0000181456 00000 н. 0000181531 00000 н. 0000181579 00000 н. 0000181655 00000 н. 0000181785 00000 н. 0000181872 00000 н. 0000181920 00000 н. 0000181996 00000 н. 0000182119 00000 н. 0000182200 00000 н. 0000182248 00000 н. 0000182324 00000 н. 0000182460 00000 н. 0000182535 00000 н. 0000182583 00000 н. 0000182659 00000 н. 0000182788 00000 н. 0000182871 00000 н. 0000182919 00000 н. 0000182995 00000 н. 0000183117 00000 н. 0000183165 00000 н. 0000183292 00000 н. 0000183367 00000 н. 0000183415 00000 н. 0000183511 00000 н. 0000183673 00000 н. 0000183755 00000 н. 0000183803 00000 н. 0000183879 00000 п. 0000184028 00000 н. 0000184111 00000 н. 0000184159 00000 н. 0000184235 00000 н. 0000184358 00000 н. 0000184433 00000 н. 0000184481 00000 н. 0000184557 00000 н. 0000184694 00000 н. 0000184769 00000 н. 0000184817 00000 н. 0000184893 00000 н. 0000185035 00000 н. 0000185110 00000 н. 0000185158 00000 н. 0000185234 00000 н. 0000185359 00000 н. 0000185433 00000 н. 0000185481 00000 н. 0000185557 00000 н. 0000185682 00000 н. 0000185757 00000 н. 0000185805 00000 н. 0000185881 00000 н. 0000186007 00000 н. 0000186082 00000 н. 0000186130 00000 н. 0000186206 00000 н. 0000186313 00000 н. 0000186361 00000 п. 0000186468 00000 н. 0000186516 00000 н. 0000186651 00000 н. 0000186732 00000 н. 0000186780 00000 н. 0000186855 00000 н. 0000186972 00000 н. 0000187020 00000 н. 0000187125 00000 н. 0000187172 00000 н. 0000187264 00000 н. 0000187311 00000 н. 0000187416 00000 н. 0000187463 00000 н. 0000187558 00000 н. 0000187605 00000 н. 0000187758 00000 н. 0000187835 00000 н. 0000187882 00000 н. 0000187964 00000 н. 0000188092 00000 н. 0000188210 00000 н. 0000188257 00000 н. 0000188343 00000 н. 0000188441 00000 н. 0000188488 00000 н. 0000188593 00000 н. 0000188640 00000 н. 0000188747 00000 н. 0000188794 00000 н. 0000188886 00000 н. 0000188933 00000 н. 0000189030 00000 н. 0000189077 00000 н. 0000189174 00000 н. 0000189227 00000 н. 0000189274 00000 н. 0000189409 00000 н. 0000189492 00000 н. 0000189539 00000 н. 0000189625 00000 н. 0000189672 00000 н. 0000189772 00000 н. 0000189819 00000 н. 0000189917 00000 н. 0000189964 00000 н. 00001 00000 н. 00001
00000 н. 0000100000 н. 00001
00000 н. 00001
00000 н. 0000100000 н. 00001
00000 н. 00001 00000 н. 00001- 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001
00000 н. 00001 00000 н. 00001 00000 н. 00001 00000 н. 00001
00000 н. 00001 00000 н. 00001 00000 н. 00001 00000 н. 00001 00000 н. 00001 00000 н. 00001 00000 н. 0000191657 00000 н. 0000191704 00000 н. 0000191808 00000 н. 0000191855 00000 н. 0000191902 00000 н. 0000191950 00000 н. 0000192055 00000 н. 0000192103 00000 н. 0000192194 00000 н. 0000192242 00000 н. 0000192374 00000 н. 0000192422 00000 н. 0000192519 00000 н. 0000192567 00000 н. 0000192615 00000 н. 0000192663 00000 н. 0000192753 00000 н. 0000192801 00000 н. 0000192849 00000 н. 0000192897 00000 н. 0000192997 00000 н. 0000193045 00000 н. 0000193133 00000 п. 0000193181 00000 н. 0000193229 00000 н. 0000193277 00000 н. 0000193365 00000 н. 0000193413 00000 н. 0000193522 00000 н. 0000193570 00000 н. 0000193618 00000 н. 0000193666 00000 н. 0000193754 00000 н. 0000193802 00000 н. 0000193850 00000 н. 0000193898 00000 н. 0000193986 00000 н. 0000194034 00000 н. 0000194082 00000 н. 0000194130 00000 н. 0000194218 00000 н. 0000194266 00000 н. 0000194375 00000 н. 0000194423 00000 н. 0000194471 00000 н. 0000194519 00000 н. 0000194628 00000 н. 0000194676 00000 н. 0000194764 00000 н. 0000194812 00000 н. 0000194860 00000 н. 0000194908 00000 н. 0000194956 00000 н. 0000195004 00000 н. 0000195091 00000 н. 0000195139 00000 н. 0000195187 00000 н. 0000195235 00000 н. 0000195345 00000 н. 0000195393 00000 н. 0000195481 00000 н. 0000195529 00000 н. 0000195577 00000 н. 0000195625 00000 н. 0000195713 00000 н. 0000195761 00000 н. 0000195809 00000 н. 0000195857 00000 н. 0000195945 00000 н. 0000195993 00000 н. 0000196081 00000 н. 0000196129 00000 н. 0000196177 00000 н. 0000196225 00000 н. 0000196313 00000 н. 0000196361 00000 н. 0000196449 00000 н. 0000196497 00000 н. 0000196545 00000 н. 0000196593 00000 н. 0000196681 00000 н. 0000196729 00000 н. 0000196853 00000 н. 0000196901 00000 н. 0000196949 00000 н. 0000196997 00000 н. 0000197085 00000 н. 0000197133 00000 н. 0000197181 00000 н.