Содержание

Механизм итальянская раскладушка «Нова»

Перейти к содержанию

Типоразмер механизма *

Введите значение80140160Вы выбрали механизм с типоразмером 80Вы выбрали механизм с типоразмером 140Вы выбрали механизм с типоразмером 160

Укомплектовать спинкой для крепления подушек *

НетДа (+3 500₽)Механизм укомплектован спинкой

Матрас *

НетМатрас «ИТСтрутофайбер» (+23 900₽)Матрас «ИТКойра» (+27 900₽)Матрас «ИТОрто» (+34 500₽)Укомплектовать матрасом «ИТСтрутофайбер»Укомплектовать матрасом «ИТКойра»Укомплектовать матрасом «ИТОрто» Укомплектовать матрасом?

Механизм итальянская раскладушка «Нова»

41 500₽

Доступно для предзаказа

Доставка, демонтаж старого механизма, установка нового входят в стоимость.

Вы можете выслать нам фотографию установленного у вас механизма, а мы подберем замену и свяжемся с вами. Это бесплатно! Выслать фото можно на E-Mail: [email protected] com или на WhatsApp +79219548971

У нас есть бесплатный выезд мастера-замерщика. Звоните 8(812)954-89-71

Все работы по замене итальянской раскладушки «Нова» производятся квалифицированными мастерами, на дому у заказчика, в удобное для заказчика, включая вечернее и входные дни.

Доступно для предзаказа

Количество товара Механизм итальянская раскладушка «Нова»

Артикул: ИТР-НОВА Категории: Итальянские раскладушки, Замена механизмов диванов, Механизмы диванов

  • Описание
  • Типоразмеры
  • Технические характеристики
  • Комплектация
  • Видео
  • Отзывы (0)
  • Полезная информация — ЧАВО

Механизм — итальянская раскладушка «Нова»

Итальянская раскладушка «Нова» — двухскладный механизм дивана с металлической сварной решеткой и эластичными ремнями в изножье.

  • Эластичные ремни, интегрированные в изножье механизма, обеспечивают более комфортное место для сидения на диване, смягчая его поверхность.
  • Механизм предназначен для каждодневного использования и рассчитан на многолетнюю эксплуатацию.
  • Длина спального места составляет 200 см, а ширина зависит от типоразмера механизма.
  • Диван с итальянской раскладушкой «Нова» раскладывается в одно движение, от его спинки. Не снимая ни одной подушки комфортабельный диван превращается в полноценную двуспальную кровать.
  • Механизм произведен в России по лицензии бельгийского концерна Sedac Meral

ТИПОРАЗМЕР МЕХАНИЗМА

80140

160

Ширина спального места
по внешней стороне каркаса (мм)

800

1400

1600

Ширина установочного места (мм)

10201620

1820

Для правильного определения типоразмера итальянской раскладушки «Нова» мы рекомендуем вызвать нашего мастера-замерщика. Выезд замерщика по Санкт-Петербургу (КАД и ЗСД) — бесплатен.

В базовой комплектации итальянская раскладушка «Нова» поставляется без рамки для крепления подушек и матраса.

Вы можете укомплектовать механизм предлагаемыми нами матрасами для итальянский раскладушек:

ИТСтрутофайбер (толщина матраса 13 см.)
ИТКойра (толщина матраса 13 см.)
ИТОрто (толщина матраса 13 см.)

Спинка для крепления подушек дивана (поставляется дополнительно)

  • Любой механизм трансформации дивана, что французская, что американская раскладушка, через некоторое время (по мере высыхания заводской смазки) начнет скрипеть, но это не является проблемой, просто механизм необходимо смазать. О том как это сделать в нашей статье «Если механизм начал скрипеть»

     

  • С итальянскими раскладушками могут использоваться, как пружинные, так и беспружинные матрасы, толщиной до 18 см. Толщина матраса зависит от модели итальянской раскладушки. Толщина беспружинного матраса должна быть на 10 мм. меньше чем у матраса с пружинами.
    В ассортименте мастерской «Мягкий мир» представлены следующие модели матрасов для итальянских раскладушек:

    • ИТСтрутофайбер — матрас средней жесткости с наполнителем из струтофайбера
    • ИТКойра — плотный жесткий матрас с поддержкой спины спящего
    • ИТОрто — самый мягкий и комфортный матрас, за счет использования натурального латекса
  • Вам также будет интересно…

    Механизм французская раскладушка «Ифагрид»

    Перейти к содержанию

    Типоразмер механизма *

    Введите значение708090100120130140150Вы выбрали механизм с типоразмером 70Вы выбрали механизм с типоразмером 80Вы выбрали механизм с типоразмером 90Вы выбрали механизм с типоразмером 100Вы выбрали механизм с типоразмером 120Вы выбрали механизм с типоразмером 130Вы выбрали механизм с типоразмером 150

    Матрас *

    НетМатрас «ФРСтрутофайбер» (+11 200₽)Матрас «ФРКойра» (+12 200₽)Укомплектовать матрасом «ФРСтрутофайбер»Укомплектовать матрасом «ФРКойра»

    Механизм французская раскладушка «Ифагрид»

    10 800₽

    Доставка, демонтаж старого механизма, установка нового входят в стоимость.

    Вы можете выслать нам фотографию установленного у вас механизма, а мы подберем замену и свяжемся с вами. Это бесплатно!
    Выслать фото можно на E-Mail: [email protected] или на WhatsApp +79219548971

    Все работы по замене механизма французская раскладушка «Ифагрид» производятся квалифицированными мастерами, на дому у заказчика, в удобное для заказчика, включая вечернее и входные дни.

    Количество товара Механизм французская раскладушка «Ифагрид»

    Артикул: ФРР-04 Категории: Французские раскладушки, Замена механизмов диванов, Механизмы диванов

    • Описание
    • Типоразмеры
    • Технические характеристики
    • Комплектация
    • Видео
    • Отзывы (0)
    • Полезная информация — ЧАВО

    Механизм дивана — французская раскладушка «Ифагрид»

    • Французская раскладушка «Ифагрид» производится в России, по лицензии франко-бельгийской компании «Sedac-Meral»
    • Механизм пригоден для ежедневного использования
    • Может устанавливаться в диваны с узкой царгой (257 мм)
    • Не имеет деревянных и пластиковых соединений
    • Универсальный механизм раскладывается в 3 шага
    • Производится с металлической сварной сеткой из прутков стали диаметром 4 мм.
    • Сварка труб конструкции механизма через специальный адаптер
    • Производство: Россия

    Типоразмер708090100120130140150
    (A) Ширина спального места по внешней стороне каркаса (мм)6807808809801180128013801480
    Ширина спального места по внутренней стороне каркаса (мм)6307308309301130123013301430
    (B) Ширина посадочного места (мм)820920102011201320142015201620

    В базовой комплектации французская раскладушка «Ифагрид» поставляется без матраса. По желанию заказчика, механизм может быть доукомплектован:

    • улучшенным нестандартным матрасом ФРСтрутофайбер, толщиной 7 см.
    • улучшенным нестандартным матрасом ФРКойра, толщиной 7 см.
  • Любой механизм трансформации дивана, что французская, что американская раскладушка, через некоторое время (по мере высыхания заводской смазки) начнет скрипеть, но это не является проблемой, просто механизм необходимо смазать. О том как это сделать в нашей статье «Если механизм начал скрипеть»

     

  • Определение типоразмера французской раскладушки — достаточно простая процедура, которую вы можете проделать самостоятельно.

    Приведем пошаговую инструкцию определения типоразмера:

    • Разложите установленный в диване механизм.
    • Снимите матрас.
    • Теперь необходимо замерить ширину спального места, включая трубки каркаса.
    • Ширина установочного места (ширина ниши) будет на 12-13 см. больше типоразмера. Замерив нишу в диване, вы можете проверить правильность определения типоразмера.

    Таблица типоразмеров французских раскладушек:

    Типоразмер механизма708090100110120130140150
    Ширина спального места по внешней стороне трубы каркаса68788898108118128138148
    Ширина спального места по внутренней стороне трубы каркаса63738393103113123133143
    Ширина установочного места8292102112122132142152162
    Длина лат (без латодержателей)62728292102112122132142
    Ширина матраса63738393103113123133143

    Если вы затрудняетесь с определением типоразмера французской раскладушки, мы всегда готовы дать вам консультацию по телефону 8 (812) 954-89-71.

    Это совершенно бесплатно.

  • С французскими раскладушками используются исключительно беспружинные матрасы толщиной до 7 см. Толщина матраса зависит от модели французской раскладушки. В тентов-латовых моделях используется матрас толщиной 5 см. В модели со сварной решеткой можно положить матрац толщиной 7 см. В ассортименте мастерской «Мягкий мир» представлены следующие модели нестандартных матрасов для французских раскладушек:

    • ФРСтрутофайбер — матрас средней жесткости с наполнителем из струтофайбера.
    • ФРКойра — плотный жесткий матрас, с кокосовой койрой, с поддержкой спины спящего.

    ВАЖНО! Французские раскладушки никогда не комплектуются пружинными матрасами. Если в на вашем механизме лежит пружинный матрац, то у вас или американская или итальянская раскладушка.

  • Вам также будет интересно…

    Механизм французская раскладушка для дивана отдельно в Санкт-Петербурге: 73-товара: бесплатная доставка [перейти]

    17 325

    Французская раскладушка на сварной сетке 140

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    108 519

    Монреаль (Релакс) КУДУК2ШП-1, механизм Французская раскладушка, 405х225х90 см Тип: раскладушка,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    17 721

    Диван-кровать Классика 2В, механизм Французская раскладушка, 140х83х101 см Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    17 721

    Диван-кровать Классика 2В, механизм Французская раскладушка, 140х83х101 см Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    17 721

    Диван-кровать Классика 2M, механизм Французская раскладушка, 146х83х101 см Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    84 680

    Прямой диван Монреаль (Релакс) ОДУК-8, механизм Французская раскладушка, 385х185х90 см Тип: диваны

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    17 721

    Диван-кровать Классика 2В, механизм Французская раскладушка, 140х83х101 см Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    51 000

    GRUPPO 396 Диван-кровать Неон двойной с механизмом французская раскладушка Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    86 060

    Монреаль (Релакс) ОДУКШП-1, механизм Французская раскладушка, 385х225х90 см Тип: раскладушка,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    23 500

    Прямой диван Ватсон с механизмом, механизм Французская раскладушка, 142х86х84 см Тип: диваны и

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    84 680

    Монреаль (Релакс) ОДУК-13 замша, механизм Французская раскладушка, 385х185х90 см Тип: раскладушка,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    17 721

    Диван-кровать Классика 2M, механизм Французская раскладушка, 146х83х101 см Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    Французская раскладушка 130тент+4латты Тип: раскладушка

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    86 060

    Прямой диван Монреаль (Релакс) ОДУКШП-3, механизм Французская раскладушка, 385х225х90 см Тип:

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    17 721

    Диван-кровать Классика 2M, механизм Французская раскладушка, 146х83х101 см Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    17 721

    Диван-кровать Классика 2M, механизм Французская раскладушка, 146х83х101 см Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    94 738

    Монреаль (Релакс) ОДУКШП-11 замша, механизм Французская раскладушка, 385х225х90 см Тип:

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    Divan78&Design / Пружина растяжения сталь 75 мм для французской раскладушки миксотойл/ мебельная фурнитура для дивана, Divan78&Design

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    32 000

    Пуфик Ампир механизм французская раскладушка Фабрика монолит Производитель: Монолит, Ширина: 77см,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    25 102

    Диван-кровать прямой Берг (Гольф) аккордеон-евро коричневая рогожка, механизм Французская раскладушка, 150х87х82 см

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    Диван детский мягкий Чудо-машинки, механизм Аккордеон, коричневый, 96x42x57 см механизм трансформации: аккордеон, число мест: 1, высота: 57 см

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    79 000

    GRUPPO 396 Диван-кровать Лагуна Люкс тройной с механизмом французская раскладушка Тип: диваны и

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    Диван детский мягкий Стив и его друзья, механизм Аккордеон, синий, 96x42x57 см механизм трансформации: аккордеон, число мест: 1, высота: 57 см

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    Диван детский мягкий Человек-Паук, механизм Аккордеон, зеленый, 96x42x57 см механизм трансформации: аккордеон, число мест: 1, высота: 57 см

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    17 721

    Диван-кровать Классика 2M, механизм Французская раскладушка, 146х83х101 см Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    26 200

    Диван Реджинальд-2 механизм французская раскладушка Фабрика монолит Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    13 500

    Кресло-кровать Садовод механизм французская раскладушка Фабрика монолит Тип: кресло-кровать,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    17 721

    Диван-кровать Классика 2В, механизм Французская раскладушка, 140х83х101 см Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    52 400

    Диван Челентано-1 механизм французская раскладушка Фабрика монолит Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    117 000

    GRUPPO 396 Диванная секция Крофорд двойная с одним подлокотником с механизмом французская раскладушка

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    17 721

    Диван-кровать Классика 2В, механизм Французская раскладушка, 140х83х101 см Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    22 000

    Пуфик Ампир Миддл механизм французская раскладушка Фабрика монолит Производитель: Монолит, Ширина:

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    28 360

    Диван Феникс механизм французская раскладушка Фабрика монолит Тип: диваны и софы, Производитель:

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    10 500

    Миксотойл 90-04

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    17 721

    Диван-кровать Уют-2, механизм Французская раскладушка, 128х85х85 см Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    84 680

    Прямой диван Монреаль (Релакс) ОДУК-12 замша, механизм Французская раскладушка, 385х185х90 см Тип:

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    35 410

    Диван Реджинальд-4 механизм французская раскладушка Фабрика монолит Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    131 000

    GRUPPO 396 Диван-кровать Крофорд двойной с механизмом французская раскладушка Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    53 285

    Кожаный прямой диван-кровать Камелот 181х89х86 см, сп. место 186х138 см, механизм французская раскладушка, цвет Черный. Мягкая мебель, диван из натуральной кожи, DIVANO

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    22 491

    Диван-кровать Дуэт, механизм Французская раскладушка, 142х94х93 см Производитель: Шарм-Дизайн,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    17 721

    Диван-кровать Уют-2, механизм Французская раскладушка, 128х85х85 см Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    60 500

    GRUPPO 396 Диван-кровать Бекер тройной с механизмом французская раскладушка Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    17 721

    Диван-кровать Уют-2, механизм Французская раскладушка, 128х85х85 см Тип: диваны и софы, Цвет:

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    26 320

    Диван Реджинальд механизм французская раскладушка Фабрика монолит Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    11 690

    Раскладной механизм РМ Миксотойл 90 (CHAIRMAN) Производитель: Chairman, Раскладная конструкция: Да,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    76 922

    Прямой диван Монреаль (Релакс) ОДУК-1, механизм Французская раскладушка, 385х185х90 см Тип: диваны

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    155 000

    GRUPPO 396 Диван-кровать Крофорд тройной с механизмом французская раскладушка Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    18 990

    Пуфик Пуф-трансформер Карни механизм французская раскладушка Фабрика монолит Производитель:

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    17 721

    Диван-кровать Классика 2В, механизм Французская раскладушка, 140х83х101 см Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    17 721

    Диван-кровать Классика 2M, механизм Французская раскладушка, 146х83х101 см Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    51 000

    GRUPPO 396 Диван-кровать Бекер двойной с механизмом французская раскладушка Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    56 940

    Диван Честер Плюс механизм французская раскладушка Фабрика монолит Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    17 721

    Диван-кровать Классика 2M, механизм Французская раскладушка, 146х83х101 см Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    13 500

    Кресло-кровать Садовод механизм французская раскладушка Фабрика монолит Тип: кресло-кровать,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    58 200

    Диван Челентано механизм французская раскладушка Фабрика монолит Тип: диваны и софы, Производитель:

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    63 500

    GRUPPO 396 Диван-кровать Этна тройной с механизмом французская раскладушка Тип: диваны и софы,

    ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары

    2 страница из 3

    Механизм раскладушка в Украине. Цены на механизм раскладушка на Prom.ua

    Работает

    Диван раскладной «Malmo» механизм «французская раскладушка»

    Под заказ

    Доставка по Украине

    от 19 700 грн

    Купить

    Производитель мебели фабрика DOICHMAN furniture (Дойчман мебель)

    Работает

    Диван раскладной механизм «французская раскладушка»

    Под заказ

    Доставка по Украине

    от 15 000 грн

    Купить

    Производитель мебели фабрика DOICHMAN furniture (Дойчман мебель)

    Работает

    Диван раскладной «London» механизм «французская раскладушка» в «английском стиле»

    Под заказ

    Доставка по Украине

    от 28 900 грн

    Купить

    Производитель мебели фабрика DOICHMAN furniture (Дойчман мебель)

    Работает

    Диван «London» честерфилд раскладной, механизм «французская раскладушка» в «английском стиле»

    Под заказ

    Доставка по Украине

    от 28 200 грн

    Купить

    Производитель мебели фабрика DOICHMAN furniture (Дойчман мебель)

    Работает

    Диван для гостиной раскладной (механизм раскладки мералат — французская раскладушка) на заказ

    Под заказ

    Доставка по Украине

    от 18 500 грн

    Купить

    Производитель мебели фабрика DOICHMAN furniture (Дойчман мебель)

    Работает

    Замена французской раскладушки Мералат

    Услуга

    от 3 500 грн

    Abba Mebel

    Работает

    Замена всех видов раскладушек в диванах

    Услуга

    от 3 500 грн

    Abba Mebel

    Работает

    Детская песочница со сдвижной крышкой Раскладушка 1,2 KDG 1,2 х 1,2 х 0,3м

    Доставка из г. Одесса

    по 9 160 грн

    от 2 продавцов

    9 160 грн

    Купить

    Gummy. Киев-Позняки.

    Работает

    Детская песочница со сдвижной крышкой Раскладушка 1,5 KDG 1,5 х1,5 х 0,3м

    Доставка из г. Одесса

    по 12 810 грн

    от 2 продавцов

    12 810 грн

    Купить

    Gummy. Киев-Позняки.

    Работает

    Детская песочница со сдвижной крышкой Раскладушка 2 KDG 2,0 х 2,0 х 0,3м

    Доставка из г. Одесса

    по 18 460 грн

    от 2 продавцов

    18 460 грн

    Купить

    Gummy. Киев-Позняки.

    Работает

    Диван прямой Честер-3 трехместный раскладной механизм трансформации Мералат (Sofyno ТМ)

    Под заказ

    Доставка по Украине

    от 49 700 грн

    Купить

    АБВ мебель

    Работает

    Мягкий трехместный диван с механизмом реклайнер — BOSTON

    Под заказ

    Доставка по Украине

    от 61 416.30 грн

    Купить

    Евродиван

    Работает

    Диван угловой Geneva раскладной механизм сидафлекс

    Под заказ

    Доставка по Украине

    от 35 000 грн

    Купить

    Производитель мебели фабрика DOICHMAN furniture (Дойчман мебель)

    Работает

    Замена американской раскладушки Cедафлекс

    Услуга

    от 6 000 грн

    Abba Mebel

    Работает

    Диван Оскар Модерн купить в Одессе, Украине

    Доставка из г. Одесса

    от 19 200 грн

    Купить

    Интернет-магазин «Шкаф-купе»

    Смотрите также

    Работает

    Диван Франц (Лефорт/Lefort) 2070х930х950мм

    Под заказ

    Доставка по Украине

    от 36 355 грн

    Купить

    Mebelfedosov интернет магазин мебели

    Работает

    Французская раскладушка Мералат

    Доставка по Украине

    от 5 500 грн

    Купить

    Abba Mebel

    Работает

    Американская раскладушка Седафлекс

    Доставка по Украине

    от 9 900 грн

    Купить

    Abba Mebel

    Работает

    Диван для гостиной раскладной (механизм раскладки мералат — французская раскладушка) на заказ

    Недоступен

    от 15 500 грн

    Смотреть

    Производитель мебели фабрика DOICHMAN furniture (Дойчман мебель)

    Работает

    Кроссовки зимние женские Buffalo London Black Fure МЕХ / Буффало Лондон Черные МЕХ (баффало)

    Недоступен

    2 000 грн

    Смотреть

    Crossmania

    Работает

    Диван со спальным местом «Джове»

    Недоступен

    от 18 800 грн

    Смотреть

    Мебельный салон «MONE»

    Работает

    Французская раскладушка на ламелях 140 см ( установочное место 152 см)

    Недоступен

    Цену уточняйте

    Смотреть

    Уют в дом

    Работает

    Кроссовки зимние женские Buffalo London White Fure МЕХ / Буффало Лондон Белые МЕХ (баффало) 37

    Недоступен

    2 450 грн

    Смотреть

    Crossmania

    Работает

    Кроссовки зимние женские Buffalo London White Fure МЕХ / Буффало Лондон Белые МЕХ (баффало) 38

    Недоступен

    2 450 грн

    Смотреть

    Crossmania

    Работает

    Кроссовки зимние женские Buffalo London White Fure МЕХ / Буффало Лондон Белые МЕХ (баффало) 39

    Недоступен

    2 450 грн

    Смотреть

    Crossmania

    Работает

    Кроссовки зимние женские Buffalo London Black Fure МЕХ / Буффало Лондон Черные МЕХ (баффало) 40

    Недоступен

    1 600 грн

    Смотреть

    Crossmania

    Работает

    Кроссовки зимние женские Buffalo London Black Fure МЕХ / Буффало Лондон Черные МЕХ (баффало) 38

    Недоступен

    3 200 грн

    Смотреть

    Crossmania

    Работает

    Кроссовки зимние женские Buffalo London Black Fure МЕХ / Буффало Лондон Черные МЕХ (баффало) 40

    Недоступен

    3 200 грн

    Смотреть

    Crossmania

    Работает

    Кроссовки зимние женские Buffalo London Black Fure МЕХ / Буффало Лондон Черные МЕХ (баффало) 37

    Недоступен

    2 000 грн

    Смотреть

    Crossmania

    Механизмы трансформации ― Мебель Эконом

    Производители используют множество механизмов трансформации. И вот так запросто выбрать среди них самую надежную и удобную схему превращения дивана в кровать — невозможно. Механизм, который задействован в понравившемся изделии, может раскладываться: «книжка», «клик-кляк», разворачиваться:«французская раскладушка», «аккордеон», выкатываться или выдвигаться: «выкатной», «еврокнижка». У каждого есть свои минусы и плюсы. На продолжительность службы самого дивана способ трансформации не влияет, но вот на габаритах, дизайне, особенностях эксплуатации изделия, в том числе на ширине и высоте получаемого спального места, сказывается. Поэтому, прежде чем сделать окончательный выбор (при том, что декоративность модели будет иметь приоритетное значение), рекомендуем тщательно взвесить обстоятельства, вынуждающие к покупке дивана. Во-первых, приобретаете ли Вы диван вместо полноценной кровати. Следовательно потребуется ежедневная трансформация, а значит скорее всего придется отказаться от так называемых «гостевых» вариатов.

    Во вторых следует оценить свободное место, которое имеется в том помещении, где вы планируете использовать раскладной диван, поскольку одни схемы трансформации нуждаются во внушительном незанятом пространстве с фронтальной стороны, а другие не позволяют устанавливать диван вплотную к стене. И наконец еще одна важная деталь, особенно пригодиться в однокомнатных квартирах, это бельевой ящик внутри дивана. Не каждый диван предпологает наличие такой опции.

    Выкатной — механизм трансформации. Механизм очень прост и надежен, а оборудованный им диван не придется отодвигать от стены. При раскладывании получается полноценное спальное место, однако располагается оно достаточно низко. Подходит для ежедневного использования. Однако, следует помнить, что механизм раскладывается вперед и поэтому перед покупкой необходимо промерить помещение, а заодно и ширину дверных проемов, так как эти диваны не разбираются при транспортировке. Минус данного механизма в том, что как и в случае с «еврокнижкой», сиденье нужно потянуть на себя, а значит есть вероятность повредить напольное покрытие.

    Порядок трансформации:

    • движением вперед и на себя выдвигаем сидение дивана;
    • раскладываем подушку сидения, преобразуя ее в матрас;
    • опускаем подушки спинки, приводя их в горизонтальное положение.

    Спальное место готово!

    Еврокнижка — механизм трансформации. У проиводителей встречаются разные наименования этой схемы трансформации: «пантограф», «Альтернатива», «тахта», «еврософа», тогда как сам механизм различий почти не имеет. Среди его плюсов: надежность, возможность устроить в диване ящик для спальных принадлежностей, простой процесс раскладывания-складывания. Диван с механизмом «Еврокнижка» в разложенном состоянии представляет собой полноценную кровать,спальное место высокое. Блоки спального места поддерживают тело во время сна, создавая эффект «прямой спины». К минусам можно отнести необходимость высвободить место перед диваном и возможность повредить напольное покрытие, так как кровать выдвигается вперед.

    Порядок трансформации:

    • удаляем декоративные подушки спинки;
    • движением вперед и на себя выдвигаем сиденье дивана;
    • опускаем подушки спинки, приводя их в горизонтальное поожение.

    Спальное место готово!

    Книжка — механизм трансформации. Один из самых старых механизмов на мебельном рынке. Очень надежный и самый простой в использовании. Напольное покрытие при раскладывании-складывании не задействовано и потому диван может быть поставлен на любую поверхность. Однако данный механизм трансформации не позволяет устанавливать диван вплотную к стене. Расстояние между стеной и спинкой дивана должно быть не менее 10-15 см.

    Порядок трансформации:

    • приподнимаем сиденье дивана, приводя его в положение полулежа, спинка при этом немного опускается. Продолжаем трансформацию, опуская спинку до упора;
    • опускаем сиденье, приводя его в горизонтальное положение.

    Спальное место готово!

    Клик-Кляк — механизм трансформации. Более усовершенствованная схема механизма трансформации «Книжка». Среди внесенных доработок — регулируемые (растовые) подлокотники и порой такие же регулируемые боковые фрагменты спинки. Диван оснащенный механизмом «Клик- кляк» имеет более сложную трех- или четырехпозиционную систему, которая позволяет принять промежуточные положения «сидя», «полулежа» («полусидя», «релакс»), «лежа». Чаще всего диван с таким механизмом имеет съемный чехол, а под сиденьем у него, скорее всего, есть ящик для постельных принадлежностей. Для трансформаци требуется свободное место между стеной и спинкой дивана не менее 10-15 см.

    Порядок трансформации:

    • опускаем растовые (подвижные) подлокотники вниз, приводя их в горизонтальное положение, выпрямляем боковые части спинки;
    • слегка приподнимаем сиденье дивана, приводя его в положение полулежа, спинка при этом немного опускается. Продолжаем трансформацию, опуская спинку до упора;
    • опускаем сиденье, приводя его в горизонтальное положение.

    Спальное место готово!

    Дельфин — механизм трансформации. Данный вид механизма используется в основном в угловых диванах. Легкий в трансформации. Преимуществом механизма «Дельфин» является то, что при трансформации из положения «диван» в положение «кровать» требуется минимальная дополнительная площадь помещения. Формируемое спальное место просторное и ровное, поскольку складывается из больших элементов дивана, один из которых- это сиденье, второе — содержится в специальном выдвижном блоке. Еще один плюс- при раскладывании получается высокое спальное место.

    Порядок трансформации:

    • найти потайной ремешк сиденья и потянуть его на себя;
    • продолжая тянуть за ремешок, выдвинуть спальное место до полного разложения.

    Спальное место готово!

    Аккордеон — механизм трансформации. Свое название механизм получил за сходство с одноименным музыкальным инструментом. Основные достоинства-высокая надежность, простота процесса раскладывания-складывания, а также незначительная площадь, которую занимает диван в сложенном виде.

    Мягкая мебель с механизмом трансформации «Аккордеон» может быть оснащена бельевым ящиком и съемным чехлом. Полноценное спальное место состоит из трех частей: одна- это сиденье дивана, две другие- спинка, ранее сложенная книжкой.

    Порядок трансформации:

    • движением вперед и на себя начинаем выдвигать сиденье дивана;
    • продолжаенм движение, постепенно раскладывая спинку;
    • когда спинка полностью развернется и зафиксируется на одном уровне с сиденьем.

    Спальное место готово!

    Французская раскладушка — механизм трансформации. Относится к так называемым «гостевым» варианатам. Однако, оборудованный «Французской раскладушкой» диван имеет один важный плюс — встает вплотную к стене. Что же касается процесса раскладывания — складывания, то он довольно утомительный. Первоначально придется снять подушки сиденья, серьезных усилий потребует и первичный рывок «француской раскладушки» вверх и на себя. А спальное место разложиться вперед, заняв слишком большую площадь.

    Так же исключается установка ящика для белья внутри дивана. Но производители от французской раскладушки не отказываютя — она не влияет на форму изделия, а значит ею можно оснастить как современный так и классический диван.

    Порядок трансформации:

    • удаляем подушки сиденья. Движением вверх и вперед приводим механизм в верхнее положение;
    • откидываем промежуточную опору и раскладываем первую ступень механизма;
    • откидываем вперед опору второй ступени и раскладываем вторую ступень механизма.

    Спальное место готово!

    французская, американская (фото и видео)

    Диваны, покупавшиеся исключительно ради посиделок перед телевизором и приданию помещению большего комфорта и уюта, отошли в прошлое, уступив место мебели, обладающей механизмом трансформации, позволяющим превратить ее в просторное спальное место.

    В настоящее время количество различных вариантов достигло такого значения, что сложности с выбором просто неизбежны, по причине чего приобретение диван-кровати способно длиться вечность,

    однако избежать подобных страданий поможет механизм французская раскладушка, обеспечивающая прекрасное место для сна.

    Содержание статьи

    1

    Особенности различных конструкций

    На рынке предлагаются 2 варианта «раскладушки»: американская и французская, которые бывают как прямыми, так и угловыми. Несмотря на кажущуюся схожесть, они значительно друг от друга отличаются:

    • численность сложений. Если французский механизм является двухсоставным, то американский – трех, что означает количество частей, из которых состоит место для сна. В результате этого также отличаются процессы трансформации.
    • глубина ниши, вмещающая в себя механизм. Различием является то, что состоящий из 2-х частей механизм занимает места больше, нежели трехсоставной. Для американской раскладушки понадобится ниша глубиной около 82 см, в то время как для французской – лишь 64 см. Кроме того, американская раскладка предусматривает наличие мечта под спинкой, предназначенного для размещения подголовника.
    • высота матраса. Отличить американскую раскладушку от французской можно очень простым способом – измерить толщину матраса. В случае если значение меньше 6 см, то диван комплектуется французской, если выше 10 см – американской. По этой причине мебель, оснащаемая французским механизмом, зачастую используется в качестве гостевого варианта не для постоянного пользования. Кроме этого, существует отличие и по комплектации механизмов – оба варианта могут оснащаться беспружинными матрасами, а пружинным блоком – исключительно американские.
    • диваны с механизмом французская раскладушка отличаются от обладающих американской типом спального места. Последний в ножной своей части оснащен сплетенными ремнями в виде сетки, которые в собранном состоянии располагаются под съемными подушками. Таким образом, увидев ножную часть, выполненную из ремней, и матрас толщиной свыше 6 см, можно быть уверенным, что диван оборудован американской раскладушкой. Во французских же используются латы с тентом или сетка.

    Отличить оба механизма друг от друга сложно, но в дальнейшем, изучив их различия по фото и видео, расположенным в большом количестве в Интернете, подобрать подходящий предмет интерьера не составит труда.

    Пошаговая схема раскладывания

    Порядок раскладывания

    Конструкционные особенности накладывают свой отпечаток на порядок раскладывания, а также размер места для сна. Французская раскладушка обладает коротким спальным местом, не очень прочным основанием (при каждодневной эксплуатации), тонким матрасом.

    Его ширина может быть 145 см максимум, длина – 185 см, большие же размеры встретить довольно сложно. Механизм трансформации французская раскладушка функционирует следующим образом:

    1. С дивана убираются подушки, Верхняя секция тянется за ручку, после чего она принимает горизонтальное положение.
    2. Поочередно разворачиваются остальные 2 секции. При этом дальняя ложится на крепежный уголок, а ножная и средняя – на п-образные опоры.

    Американская раскладушка трансформируется схожим образом за тем лишь исключением, что секций на одну меньше, а подушки убирать нет нужды – они опускаются во время раскладывания.

    Оба варианта раскладываются не очень быстро, также категорически не рекомендуется использовать их в качестве батута, так как это чревато выходом механизма их строя.

    Варианты отделки

    Диваны, оснащенные как механизмом американская раскладушка, так и французская, могут иметь различную обивку, подбираемую каждым покупателем индивидуально.

    Некоторые отдают предпочтение кожаному покрытию, так как мебель выглядит презентабельно, к тому же материал долговечен и устойчив ко всякого рода повреждениям.

    Внимание! Популярностью пользуется и ткань, которая также имеет высокие показатели прочности и износостойкости, обладает большим количеством цветовых решений.

    Кроме того, на тканевые покрытия может быть нанесен тефлоновый слой, предотвращающий быстрое намокание при попадании на поверхность влаги, что позволяет без последствий сразу же ее очистить.

    Цвет, фактура и прочие особенности выбираются индивидуально при покупке или заказе изделия, исходя из интерьера, личных предпочтений и пр.

    Ремонт поврежденного механизма

    При покупке дивана следует учитывать, что его поломка ввиду большого количества частей неизбежна. Например, американская раскладушка страдает изнашиванием механизма трансформации подголовника, произвести ремонт которого невозможно.

    В некоторых же случаях устранить неисправность можно и самостоятельно, например, при износе заклепки, связующей подвижные каркасные детали. В этом случае ее можно просто заменить болтом.

    Множество дефектов проявляется по причине неправильной смазке, в результате чего элементы проскальзывают мимо фиксирующих упоров, а также элементарного стирания деталей.

    Все же в случае поломки мебели лучшим вариантом будет предоставление замены ее механизма специалистам.

    Используемые матрасы

    При изготовлении диванов, оснащенных механизмом трансформации раскладушка, используются только матрасы на основе ППУ небольшой толщины до 6 см, что не дает конструкции испытывать чересчур большие нагрузки при складывании, которые могут повлечь за собой быстрый выход ее из строя.

    Помните! Американская же раскладушка, напротив, поставляется с довольно толстыми матрасами 10-14 см, которые могут быть пружинными и на базе ППУ.

    Этот вариант механизма также может оснащаться многослойными вариантами, например, иметь слой мягкого наполнителя в верхней его части и пружинный блок – в нижней.

    Размеры матраса отличаются и зависят от конкретной модели определенного производителя.

    При желании приобрести новый матрас или заменить вышедший из строя, перед покупкой следует измерить размеры каркаса,

    однако при покупке нужно указывать ширину и длину изделия меньшую на 3-5 см, иначе при складывании возрастает нагрузка на клепаные каркасные соединения, что существенно понижает срок эксплуатации конструкции.

    Видео с примером раскладывания механизма трансформации «американская раскладушка»:

    Microsoft Word — CEDA_2006_Clamshell.doc

    %PDF-1.7 % 137 0 объект >/OCGs[1568 0 R]>>/StructTreeRoot 1150 0 R/Тип/Каталог/PageLabels 125 0 R>> эндообъект 139 0 объект > эндообъект 134 0 объект >поток Acrobat Distiller 6. 0 (Windows)2006-08-30T22:03:02+02:00PScript5.dll Версия 5.2.22010-04-12T13:43:55+02:002010-04-12T13:43:55+02:00uuid: 1c25c3aa-9595-4076-aaf7-21fef911d24euuid:e41bee6e-02df-4bb9-b314-957f6b2b73b3application/pdf

  • Microsoft Word — CEDA_2006_Clamshell.doc
  • Сапе Мидема
  • конечный поток эндообъект 1571 0 объект >/Кодировка>>>>> эндообъект 127 0 объект > эндообъект 1150 0 объект > эндообъект 125 0 объект > эндообъект 126 0 объект > эндообъект 1151 0 объект > эндообъект 1551 0 объект > эндообъект 1562 0 объект > эндообъект 1563 0 объект > эндообъект 1567 0 объект > эндообъект 1564 0 объект > эндообъект 1565 0 объект > эндообъект 1566 0 объект > эндообъект 1552 0 объект > эндообъект 1554 0 объект > эндообъект 1556 0 объект > эндообъект 1558 0 объект > эндообъект 1560 0 объект > эндообъект 1561 0 объект > эндообъект 1446 0 объект >>]/P 1444 0 R/S/Link/Pg 747 0 R>> эндообъект 1437 0 объект >>]/P 1435 0 R/S/Link/Pg 747 0 R>> эндообъект 1440 0 объект >>]/P 1438 0 R/S/Link/Pg 747 0 R>> эндообъект 1443 0 объект >>]/P 1441 0 R/S/Link/Pg 747 0 R>> эндообъект 1428 0 объект >]/P 1426 0 R/S/Link/Pg 747 0 R>> эндообъект 1431 0 объект >>]/стр. 14290 R/S/Link/Pg 747 0 R>> эндообъект 1434 0 объект >>]/P 1432 0 R/S/Link/Pg 747 0 R>> эндообъект 1453 0 объект >>]/P 1451 0 R/S/Link/Pg 747 0 R>> эндообъект 1471 0 объект >>]/P 1469 0 R/S/Link/Pg 747 0 R>> эндообъект 1474 0 объект >>]/P 1472 0 R/S/Link/Pg 747 0 R>> эндообъект 1462 0 объект >>]/P 1460 0 R/S/Link/Pg 747 0 R>> эндообъект 1465 0 объект >>]/P 1463 0 R/S/Link/Pg 747 0 R>> эндообъект 1468 0 объект >>]/P 1466 0 R/S/Link/Pg 747 0 R>> эндообъект 1477 0 объект >>]/P 1475 0 R/S/Link/Pg 747 0 R>> эндообъект 1522 0 объект >]/P 1520 0 R/S/Link/Pg 187 0 R>> эндообъект 1516 0 объект >>]/P 1514 0 R/S/Link/Pg 187 0 R>> эндообъект 1507 0 объект >>]/P 1505 0 R/S/Link/Pg 187 0 R>> эндообъект 15190 объект >>]/P 1517 0 R/S/Link/Pg 187 0 R>> эндообъект 1510 0 объект >]/P 1508 0 R/S/Link/Pg 187 0 R>> эндообъект 1513 0 объект >]/P 1511 0 R/S/Link/Pg 187 0 R>> эндообъект 1504 0 объект >>]/P 1502 0 R/S/Link/Pg 187 0 R>> эндообъект 1501 0 объект >>>]/P 1499 0 R/S/Link/Pg 187 0 R>> эндообъект 1498 0 объект >>]/P 1496 0 R/S/Link/Pg 187 0 R>> эндообъект 1495 0 объект >>]/P 1493 0 R/S/Link/Pg 187 0 R>> эндообъект 1490 0 объект >>]/P 1488 0 R/S/Link/Pg 187 0 R>> эндообъект 1480 0 объект >]/P 1478 0 R/S/Link/Pg 187 0 R>> эндообъект 1487 0 объект >>]/P 1485 0 R/S/Link/Pg 187 0 R>> эндообъект 1525 0 объект >>]/P 1523 0 R/S/Link/Pg 158 0 R>> эндообъект 1528 0 объект >]/P 1526 0 R/S/Link/Pg 158 0 R>> эндообъект 1531 0 объект >>]/P 1529 0 R/S/Link/Pg 158 0 R>> эндообъект 1534 0 объект >>]/P 1532 0 R/S/Link/Pg 158 0 R>> эндообъект 12490 объект >>]/P 1247 0 R/S/Link/Pg 1034 0 R>> эндообъект 1226 0 объект >>]/P 1224 0 R/S/Link/Pg 1034 0 R>> эндообъект 1253 0 объект >>]/P 1251 0 R/S/Link/Pg 1034 0 R>> эндообъект 1257 0 объект >>]/P 1255 0 R/S/Link/Pg 1034 0 R>> эндообъект 1258 0 объект >]/P 1255 0 R/S/Link/Pg 1034 0 R>> эндообъект 1223 0 объект >]/P 1220 0 R/S/Link/Pg 1034 0 R>> эндообъект 1242 0 объект >]/P 1239 0 R/S/Link/Pg 1034 0 R>> эндообъект 12390 объект > эндообъект 1034 0 объект >/Шрифт>/ProcSet[/PDF/Text]/ExtGState>>>/Тип/Страница>> эндообъект 1036 0 объект [1093 0 Р 1091 0 Р 1089 0 Р 1087 0 Р 1085 0 Р 1083 0 Р 1081 0 Р 1079 0 Р 1077 0 Р 1075 0 Р 1073 0 Р 1071 0 Р 1069 0 Р 1067 0 Р 1065 0 Р 1063 0 0 R 1059 0 R 1057 0 R 1055 0 R 1053 0 R 1051 0 R 1049 0 R 1047 0 R 1045 0 R 1043 0 R 1041 0 R 1039 0 R 1037 0 R] эндообъект 130 0 объект > эндообъект 1913 0 объект >поток HWnH}7Âڕ6` ي3Ύc#$$T2cb~BR2uGS:_%jFr!bJwgԅ_Kb~dǁǙ:hQWqل’PۇhW:+cY|L7 />DQPq`8 Ƀ:mωv:Z4ukRКПП’^TnJʷ)M; uzV-VP/ELJQ ^&Jkrʠ44)1&wۿ!ɬַ̚M|i»dBmf»y(*NEVDŽQ CkQل%˺dJwK_XxcwE9=zN`S쩛yVȷi۫551UZU]6 ̃ЛķMYKQ(w,sr̥fӻhX7#»wC4bᵺN)*yIwH ά{?Cnqr9,Tڃ. x4فyvP_WL|RHcfZEO_ٲD·[email protected]&[@Caqvv Ӥ,&2>0gH=;2 9000gH=;2 9000gH=;2 миллисекундные движения моллюсков в лиганд-связывающих доменах ионотропных рецепторов глутамата

    Abstract

    Ионотропные рецепторы глутамата (iGluRs) опосредуют передачу сигнала в головном мозге и являются важными мишенями для лекарств Структурные исследования показывают снимки iGluRs, которые обеспечивают механистическое понимание стробирования, но быстрые движения, управляющие механизмом рецептора, в значительной степени неуловимы.Здесь мы обнаруживаем кинетику конформационных изменений изолированных лигандсвязывающих доменов в форме моллюска (LBD) из трех основных подтипов iGluR, которые инициируют стробирование при связывании агонистов.Мы разрабатываем флуоресценцию зонды для измерения движения доменов с помощью наносекундной флуоресцентной корреляционной спектроскопии Мы наблюдаем широкий кинетический спектр динамики LBD, которая лежит в основе активации iGluRs. ции и замораживания при связывании полных и частичных агонистов. Мы раскрываем аллостерическое связывание в гетеродимерах NMDA LBD, где связывание L-глутамата с LBD GluN2A останавливает движение моллюсков глицин-связывающего LBD GluN1. Наши результаты показывают быструю динамику LBD в iGluR и предполагают механизм отрицательной аллостерической кооперативности в рецепторах NMDA.

    Введение

    Передача сигнала в возбуждающих синапсах опосредована ионотропными рецепторами глутамата (iGluRs), которые повсеместно экспрессируются в центральной нервной системе 1,2 . iGluR представляют собой управляемые лигандом ионные каналы, которые играют ключевую роль в развитии мозга и когнитивных функциях более высокого порядка, включая обучение и память. Неисправность рецепторов способствует различным расстройствам головного мозга, таким как эпилепсия, инсульт, болезнь Альцгеймера и шизофрения 3 . Следовательно, iGluRs являются важными мишенями для разработки лекарств. Основываясь на фармакологии и структурной гомологии, iGluRs делятся на три основных подтипа, а именно рецепторы AMPA, kainate и NMDA, все из которых образуют трансмембранные тетрамерные сборки 1 . Каждая субъединица рецептора построена из полуавтономных доменов, соединенных гибкими линкерами. Одна субъединица состоит из внеклеточного N-концевого и лиганд-связывающего доменов, трансмембранного ионного канала и внутриклеточного С-концевого домена (NTD, LBD, TMD и CTD соответственно) 4 . Внеклеточные NTD и LBD представляют собой димерные двухлопастные структуры, напоминающие раковины моллюсков. Двухлопастная форма LBD структурно сходна с бактериальными периплазматическими белками, связывающими аминокислоты 5 . Два слоя внеклеточных доменов iGluR, образованные NTD и LBD соответственно, организованы как димеры димеров. Активация рецептора запускается связыванием агониста с междолевой щелью LBD. Закрытие грейфера переносится на ворота за счет вращения нижней доли D2 9 вверх.0017 6 , запускающий поток ионов для деполяризации постсинаптической клетки, обеспечивающий передачу сигнала 7 .

    За последние два десятилетия структурные исследования, включающие рентгеновскую кристаллографию и криоэлектронную микроскопию (крио-ЭМ) вместе с электрофизиологией, позволили получить детальное представление о взаимосвязи структура-функция iGluRs 4,8 . Кристаллическая и крио-ЭМ структуры гомо- и гетеромерных iGluR из AMPA 9,10,11,12,13,14 , NMDA 15,16,17,18,19 и каинат 20 подтипов представили механизмы управления воротами. iGluR-опосредованная передача сигнала уходит своими корнями в сложную сеть конформационных движений отдельных доменов, которые ускользают от экспериментального наблюдения. Начинают определяться динамика отдельных доменов, их междоменная связь и модуляция путем связывания агонистов и антагонистов 21 . Исследования переноса энергии резонансной флуоресценции одиночной молекулы (smFRET) предоставили дополнительную информацию о переходах между структурными конечными состояниями в растворе и выявили их конформационную гетерогенность 22 .

    Особое внимание уделяется LBD, «мышце» рецептора, с движениями домена, обеспечивающими триггер, который инициирует открытие каналов 23 . Множество кристаллических структур изолированных LBD в комплексе с различными ант/агонистами показывают, что домен может принимать различные конформации 3,24 . Однако степень их заполнения в растворе и временные шкалы их взаимного превращения остаются неясными. Моделирование молекулярной динамики предполагает, что LBD заполняет более расширенный ансамбль конформаций, чем наблюдается экспериментально 25 .

    Кинетика гейтирования различается между подтипами iGluR 8 и зависит от природы агониста внутри подтипа 26 . AMPA/каинатные рецепторы деактивируются в течение нескольких мс, в то время как для рецепторов NMDA требуются сотни мс 2 . Быстрая кинетика активации рецепторов 1 позволяет предположить, что элементарная динамика моллюсков LBD, лежащая в основе стробирования, имеет столь же быструю временную шкалу мс или субмс. Структурные исследования предполагают, что амплитуды движений лепестков LBD составляют порядка одного нанометра (нм) 1,27,28 . Это требует спектроскопических методов с высоким разрешением, чувствительных во временном масштабе до миллисекунд и пространственном масштабе в одну нанометр, для обнаружения функционально значимых движений лепестков.

    Здесь мы разработали флуоресцентные зонды, которые в сочетании с флуоресцентной корреляционной спектроскопией (FCS) отвечают этим требованиям к высокому разрешению. Мы использовали чувствительный к окружающей среде оксазиновый флуорофор, который мы пометили специфично для устьев изолированных моллюсков LBD из трех основных подтипов iGluR, а именно AMPA, каината и NMDA. Метка преобразует конформационные флуктуации LBD в флуктуации флуоресценции, которые обнаруживаются с помощью FCS 9.0017 29 . Мы описываем выраженные субмиллисекундные флуктуации в апо-состоянии LBD всех трех подтипов и изучаем их модуляцию при связывании и димеризации агонистов. Мы также раскрываем путь аллостерической коммуникации в динамике NMDA LBD через интерфейс димеризации.

    Результаты

    Субмиллисекундные движения моллюсков LBD iGluR

    Для обнаружения межлепестковых движений между верхними долями D1 и нижними долями D2 (конформационная динамика моллюска) мы использовали экологически чувствительный флуорофор AttoOxa11 (Atto-Tec). который сообщает об изменениях в своем микроокружении изменением интенсивности флуоресцентного излучения в дальнем красном диапазоне спектра. Флуоресценция AttoOxa11 эффективно гасится при образовании ван-дер-ваальсового контакта с боковой цепью триптофана (Trp) посредством фотоиндуцированного переноса электронов (ПЭТ) (рис. 1а) 30 . Быстрые конформационные изменения, которые сопровождаются образованием и нарушением взаимодействия флуорофора/Trp, приводят к флуктуациям флуоресценции ПЭТ, которые можно обнаружить с помощью FCS (PET-FCS) 29,31 . Мы ввели AttoOxa11 в долю D1 подтипов iGluR LBD путем мутации боковой цепи, подверженной воздействию растворителя, на цистеин (Cys) и модификации ее тиол-реактивным AttoOxa11. Природный тушитель Trp (W) был введен в долю D2 (рис. 1b–d). Сайты маркировки в нашем дизайне репортера напоминают структурные координаты, выбранные в качестве меры динамики моллюсков GluA2 LBD в предыдущих компьютерных симуляциях молекулярной динамики 25 . Нативные боковые цепи Cys в LBD либо скрыты, либо образуют структурные дисульфиды и, таким образом, не мешают сайт-специфической модификации сконструированного Cys. Это было очевидно из контрольных экспериментов, где испытания модификации LBD дикого типа дали только ~ 10% меченого белка, тогда как LBD, содержащие сконструированные остатки Cys, дали ~ 60% меченого белка (дополнительная таблица 1).

    Рис. 1. Конструкция флуоресцентного репортера для обнаружения движений моллюсков LBD iGluR.

    a Структурная архитектура iGluRs и расширенный обзор LBD, включая дизайн флуоресцентного репортера PET для движений ракушки. В двухлопастной структуре моллюска LBD сконструированный Cys (красные палочки), модифицированный флуорофором (оранжевая сфера), и сконструированный Trp (синие палочки) в устье раковины моллюска обнаруживают конформационную динамику (серая стрелка) посредством контактно-индуцированного тушение флуоресценции. Связанный агонист показан в виде желтых сфер, а верхняя доля D1 и нижняя доля D2 обозначены. b d Кристаллические структуры связанных с агонистом GluA2 ( b ), GluK1 ( c ) и GluN1 (d ) LBD в комическом представлении (идентификаторы PDB: 2UXA, 1TXF и 1PB7; для GluA2, GluK1 и GluN1 соответственно). Конструкции ориентированы, как показано на правой стороне панели ( и ). Сайты для модификации флуоресценции (инженерный Cys) показаны красными палочками. Сконструированные остатки Trp показаны синими палочками. Связанный агонист выделен желтыми сферами.

    Полноразмерное изображение

    Мы провели эксперименты FCS, используя установку конфокального флуоресцентного микроскопа. Для LBD GluA2 и GluK1 AMPA- и каинатного типа одноточечные (т.е. отрицательный контроль) мутанты G446C и K503C, модифицированные AttoOxa11, дали один спад автокорреляционной функции (ACF). Одиночные затухания в АКФ происходили в миллисекундном (мс) временном масштабе и возникали из-за флуктуаций, вызванных броуновской диффузией LBD через фокус детектирования. В то время как ACF от одноточечных мутантов не демонстрировали дополнительных колебаний флуоресценции на шкале времени субмс, двойные мутанты GluA2 G446C-T685W и GluK1 K503C-K734W показали выраженные релаксации субмс значительной амплитуды (рис. 2a, b). Эти дополнительные релаксации возникают из-за движений между лепестками D1 и D2, которые приводят к быстрому формированию и разрушению ван-дер-ваальсовых контактов между AttoOxa11 и сконструированными боковыми цепями W685 и W734. Однако для LBD GluN1 NMDAR флуоресцентно модифицированный одноточечный мутант A480C показал субмс-распад в ACF даже без сконструированного остатка Trp в нижней доле D2 (рис. 2c). Тестирование различных природных аминокислот в качестве потенциальных гасителей флуоресценции показало, что оксазиновые флуорофоры в значительной степени тушатся Trp, немного тушатся тирозином (Tyr, Y), но не тушатся фенилаланином (Phe, F) 32 . В структуре LBD GluN1 мы обнаружили W498/W731 и Y703/Y711 вблизи положения маркировки A480C, остатки, которые могут подавлять флуоресценцию AttoOxa11 (дополнительная рис. 1a). Мы мутировали эти нативные остатки Trp и Tyr по отдельности в фенилаланин (Phe, F), чтобы проверить их потенциальную роль в тушении флуоресценции AttoOxa11 в положении A480C в экспериментах с FCS. Мутация Trp на Phe является структурно консервативной, поскольку она заменяет ароматический индольный фрагмент на ароматический бензол и устраняет потенциальное тушение с помощью Trp. Мы обнаружили, что релаксации sub-ms все еще присутствовали в ACF мутантов F и почти не отличались от релаксаций, обнаруженных для мутанта псевдодикого типа A480C. (Дополнительный рис. 1b, дополнительная таблица 2). Результаты показали, что колебания, обнаруженные у GluN1-A480C, являются результатом изменений в микроокружении чувствительной к окружающей среде метки, таких как полярность, которые были опосредованы конформационными движениями LBD.

    Рис. 2: Динамика раскладушки AMPA, каината и NMDA iGluR LBD в апо-состоянии, измеренная с использованием FCS.

    а в АКФ (G(τ)), нормированные на среднее число молекул в фокусе детектирования, зарегистрированные для GluA2 ( a ), GluK1 ( b ) и GluN1 ( c ) LBD. ACF GluA2-LBD-G446C ( a ) и GluK1-LBD-K503C ( b ) показаны синим цветом. ACF GluA2-LBD-G446C-T685W ( a ) и GluK1-LBD-K503C-K734W ( b ) показаны красным цветом. ACF GluN1-A480C показан красным ( c ). Черные линии соответствуют данным с использованием модели молекулярной диффузии, содержащей сумму от одной до четырех одноэкспоненциальных релаксаций (указанных в ( d f )). d f Амплитуды (заштрихованные столбцы) и соответствующие константы времени (незакрашенные столбцы), полученные в результате подгонки обнаруженных экспоненциальных фаз в АКФ GluA2 ( d ), GluK1 ( e ) и GluN1 ( ф ) LBD. Наборы данных и цветовой код соответствуют ACF, показанным на панелях ( a c ). Крестики (X) обозначают отсутствующую (не обнаруженную) кинетику. Столбики погрешностей s.d. трех измерений ( n = 3).

    Полноразмерное изображение

    Релаксации субмс, очевидные в АКФ GluA2 и LBD GluN1, хорошо описывались суммой трех одноэкспоненциальных распадов (рис. 2a, c, d, f). Для описания релаксаций LBD GluK1 потребовалась сумма четырех одноэкспоненциальных распадов (рис. 2b, e). Уменьшение количества экспонент в применяемой модели подгонки приводило к отклонениям подгонки от данных, а добавление дополнительной экспоненты приводило либо к отсутствию значимого улучшения, либо к переподгонке, что проявлялось в появлении физически необоснованных параметров подгонки ( Дополнительный рис. 2). Следовательно, мы сочли трехэкспоненциальную модель при описании данных LBD GluA2 и GluN1, а четырехэкспоненциальную модель при описании данных LBD GluK1 наиболее подходящей. В целом, мы обнаружили, что режимы движения раковины в этом семействе LBD были во временных масштабах ~100 мкс, ~10 мкс и ~1 мкс. Мы наблюдали специфические для подтипа вариации постоянных времени и амплитуд (рис. 2d – f).

    Связывание полных и частичных агонистов останавливает движение моллюска

    Затем мы исследовали влияние связывания лиганда на динамику моллюска LBD. С этой целью мы применяли насыщающие концентрации агониста к флуоресцентно модифицированным LBD и регистрировали ACF с использованием FCS. l-глутамат (Glu) применяли в качестве агониста для AMPA- и каинатных LBD (конструкции GluA2-G446C-T685W и GluK1-K503C-K734W), а глицин (Gly) наносили на NMDA GluN1-A480C LBD. Glu и Gly не влияли напрямую на флуоресценцию метки AttoOxa11, что было очевидно из контрольных экспериментов FCS, в которых мы применяли агонисты к флуоресцентно модифицированным конструкциям, не содержащим сконструированного Trp, или только к красителю (дополнительная рис. 3). Для Trp-содержащих мутантов мы наблюдали исчезновение суб-мс-распадов ACF при связывании агониста с LBD, что контрастировало с состоянием апо, которое демонстрировало мкс-релаксации значительной амплитуды (рис. 3). Каинат GluK1 LBD продемонстрировал потерю мкс релаксации при связывании Glu, подобно другим гомологам. Но, в отличие от гомологов, увеличилась амплитуда 200-нс кинетической фазы (рис. 3б, д). Это указывало на существенную подвижность в связанном с агонистом состоянии предположительно локального структурного элемента GluK1 LBD, которая колебалась во временной шкале субмкс. Связанные с агонистом LBD GluA2 и GluN1 демонстрировали остаточные флуктуации малых амплитуд с соответствующими постоянными времени на временной шкале 300 нс и 5 мкс (рис. 3d, f).

    Рис. 3: Влияние связывания агониста на динамику LBD iGluR.

    а в АКФ, (G(τ)), нормированные на среднее число молекул в фокусе детектирования, записанные по GluA2-LBD-G446C-T685W ( a ), GluK1-LBD-K503C -K734W ( b ) и GluN1-A480C ( c ) LBD в отсутствие (красный) и в присутствии (голубой) агониста. LBD GluA2 и GluK1 имели Glu в качестве агониста. GluN1 LBD содержал Gly в качестве агониста. Черные линии аппроксимируют данные с использованием модели молекулярной диффузии, содержащей сумму от одной до четырех одноэкспоненциальных релаксаций (указаны на ( д ф )). d f Амплитуды (черные столбцы) и соответствующие постоянные времени (светлые столбцы) экспоненциальных распадов АКФ GluA2 ( d ), GluK1 ( e ) и GluN1 ( f ) LBD. Наборы данных и цветовой код соответствуют ACF, показанным на панелях ( a c ). Крестики (X) обозначают отсутствующую (не обнаруженную) кинетику. Столбики погрешностей s.d. трех измерений ( n = 3). г Нормализованные ACF, зарегистрированные для GluA2-LBD-G446C-T685W в отсутствие (красный) и в присутствии квисквалата (синий), Glu (голубой), виллардиина (пурпурный), 5-йодвиллардина (зеленый) и каината ( апельсин). Черные линии соответствуют данным с использованием модели молекулярной диффузии, содержащей сумму от одной до трех одноэкспоненциальных релаксаций.

    Изображение в полный размер

    Чтобы исключить артефакты, вызванные зондом, и проверить функциональность модифицированных LBD, мы провели эксперименты по титрованию лиганда, в которых мы добавили возрастающие концентрации агониста к флуоресцентно модифицированным конструкциям. Мы использовали величину субмс амплитуд флуктуаций в качестве меры для связанного/несвязанного состояния. Постепенные потери суб-мс амплитуд с увеличением концентрации агонистов были хорошо описаны моделью изотермы связывания (дополнительная рис. 4). Анализы дали равновесные константы диссоциации ( K d ) для связывания агонистов, которые находились в диапазоне значений, указанных в литературе. То есть мы обнаружили K D (GLUA2-LBD-G446C-T685W/GLU) = 2,4 ± 0,7 мкм (литература 33,34,35,36,37 : K D = 0,18: K D = 0,18: K D =. мкм), K D (Glun1-A480C/GLY) = 13 ± 3 мкм (литература 38 : K D = 26 мкм) и K 99999999999999999 гг. K503C-K734W/Glu) = 7 ± 3 мкМ. Незначительные расхождения между нашими значениями и значениями из литературы могут быть объяснены различными условиями раствора, применяемыми в разных экспериментальных условиях, или модификацией флуоресценции. Мы пришли к выводу, что исследованные домены после модификации оставались полностью функциональными.

    В совокупности наши результаты показали, что внутри этих гомологов iGluR LBD конформационные движения µs высокодинамичных апо-состояний были потеряны при связывании агонистов. Это проявлялось либо в полной потере кинетических фаз, либо в ослабленных экспоненциальных сигналах уменьшенных амплитуд затухания.

    Затем мы сравнили влияние связывания полных и частичных агонистов 1 на динамику моллюсков GluA2 LBD. Мы применили насыщающие концентрации агонистов квисквалата, l-Glu, виллардиина, 5-йодвиллардиина и каината (перечислены в порядке убывания эффективности) к образцам GluA2-G446C-T685W и записали ACF с использованием FCS. Для всех пяти агонистов мы наблюдали аналогичное замедление движений моллюсков в мкс (рис. 3g, таблица 1). Кинетика остаточных микросекундных флуктуаций LBD GluA2 в присутствии квасквалата и 5-иодвиллардиина имела амплитуды <10%, что мы считаем слишком малым для надежного определения движения. Таким образом, мы не обнаружили заметных различий в способах действия частичных агонистов по сравнению с полными агонистами в отношении модуляции конформационной динамики LBD.

    Таблица 1. Кинетика субмсекционных движений моллюска GluA2-LBD-G446C-T685W в присутствии частичных и полных агонистов.

    Полноразмерный стол

    Димеризация замедляет движение моллюсков LBD

    Внутри полноразмерных сборок iGluR LBD образуют димеры 9 . Мы исследовали влияние димеризации LBD на динамику их ракушечника. Изолированные LBD из подтипов AMPA и NMDA iGluR не образуют димеров в растворе вплоть до концентрации белка в мг/мл 39,40 . Мутация L483Y на поверхности димера GluA2 LBD стабилизирует гомодимер в растворе ( K d  = 0,03 мкМ) 39 . Сходным образом, мутации N521Y и E516Y в GluN1 и GluN2A LBD вызывают образование специфических гетеродимеров, т.е. образование сборки GluN1-GluN2A LBD 40 . Мы ввели мутации L483Y, N521Y и E516Y в LBD GluA2, GluN1 и GluN2A соответственно. Динамику гомодимеров, образованных LBD GluA2, исследовали путем регистрации ACF GluA2-LBD-G446C-T685W-L483Y в присутствии избытка GluA2-LBD-L483Y (рис. 4а). Динамику гетеродимеров, образованных LBD GluN1/GluN2A, исследовали путем измерения ACF GluN1-LBD-A480C-N521Y в присутствии избытка GluN2A-LBD-E516Y (рис. 4b). Постоянная времени диффузии, τ D , глобулы прямо пропорциональны ее гидродинамическому радиусу, R h 41 . Мы определили значения R h для Glu-связанного мономера и димера GluA2-LBD, а также для Gly-связанного мономера GluN1-LBD и для Gly/Glu-связанного гетеродимера GluN1/GluN2A LBD. Мы сравнили эти значения с рассчитанными по кристаллическим структурам (таблица 2). R h LBD GluA2, измеренная в растворе с использованием FCS, была значительно больше, чем значение, рассчитанное по структуре. Этот вывод согласуется с ансамблем динамических и более расширенных конформаций LBD в растворе, чем в кристалле. Этот вывод был также предсказан моделированием молекулярной динамики 25 . Для димеров LBD мы наблюдали увеличение R h на ~ 30% по сравнению с мономерами (таблица 2). Это было ожидаемо, потому что удвоение молекулярной массы глобулы приводит к \(\root 3 \of {2}\)-кратному (26%) увеличению R h 41 .

    Рис. 4: Динамика раскладушки димерных LBD iGluR.

    a АКФ, G(τ), нормированные на среднее число молекул в фокусе детекции, зарегистрированные для GluA2-LBD-G446C-T685W-L483Y (апомономер, красный) и в присутствии избытка GluA2-LBD- L483Y (апо-димер, оранжевый). ACF димера в присутствии агонистов Glu и AMPA показаны голубым и серым цветом (димеры, связанные с агонистом). b ACF записаны для GluN1-LBD-A480C-N521Y (апо-мономер, красный) и в присутствии избытка GluN2A-LBD-E516Y (апо-гетеро-димер, оранжевый). АКФ гетеродимера GluN1-GluN2A в присутствии агониста Gly показан голубым цветом. Черные линии соответствуют данным с использованием модели молекулярной диффузии, содержащей сумму от одного до трех одноэкспоненциальных распадов (указанных в ( c , d )). c Амплитуды (закрашенные столбцы) и соответствующие константы времени (незакрашенные столбцы) экспоненциального распада АКФ мономерного и димерного LBD GluA2 в связанных состояниях апо и агониста. Наборы данных и цветовой код соответствуют ACF, показанным на панели ( и ). Крестики (X) обозначают отсутствующую (не обнаруженную) кинетику. d Амплитуды (закрашенные столбцы) и соответствующие константы времени (незакрашенные столбцы) экспоненциального распада АКФ мономерного и гетеродимерного GluN1 LBD в состояниях, связанных с апо и агонистом. Наборы данных и цветовой код соответствуют ACF, показанным на панели ( b ). Крестики (X) обозначают отсутствующую (не обнаруженную) кинетику. Столбики погрешностей s.d. трех измерений ( n = 3).

    Полноразмерное изображение

    Таблица 2. Гидродинамические радиусы LBD AMPA и NMDA, измеренные с помощью FCS и сравненные со значениями, рассчитанными на основе доступных рентгеновских структур.

    Полноразмерная таблица

    Мы обнаружили, что картина суб-мс кинетики движений моллюсков LBD, обнаруженная в апомономерах, сохранялась в димерах (рис. 4c, d). Однако конформационные движения замедлялись, о чем свидетельствовало увеличение постоянных времени всех трех суб-мс-релаксаций при димеризации. Соответствующие амплитуды уменьшались при димеризации (рис. 4в, г). Связывание агониста останавливало конформационную динамику µs в димерах, подобно тому, что мы наблюдали для мономеров, о чем свидетельствует исчезновение релаксаций µs (рис. 4). Мы также применяли более эффективный агонист AMPA 9.0017 26 к GluA2 LBD. Мы обнаружили, что изменения динамики были практически неотличимы от тех, которые наблюдались при связывании Glu: мы наблюдали остановку конформационных релаксаций двух микросекунд. Остаточные наносекундные флуктуации, которые имели аналогичные амплитуды и постоянные времени (рис. 4c).

    Аллостерическая передача движений моллюсков в LBD NMDA

    LBD NMDA образуют облигатные гетеродимеры, в отличие от AMPA- и каинатных подтипов, которые образуют как гомо-, так и гетеродимеры. В NMDAR LBD GluN1 связывает глицин (Gly), в то время как LBD GluN2A связывает l-глутамат (Glu), а изолированные LBD GluN1 и GluN2A могут собираться в гетеродимеры в растворе 9.0017 40 (рис. 4). Это дало возможность изучить аллостерическую связь между двумя LBD, то есть влияние, которое Glu-связывание с LBD GluN2A оказывает на динамику LBD GluN1 (рис. 5a). Мы обнаружили, что Gly, полный агонист GluN1, как и ожидалось, останавливает движения моллюсков LBD GluN1 внутри димера GluN1/GluN2A. Интересно, однако, что связывание Glu с GluN2A в гетеродимере остановило движение моллюска апо GluN1 LBD внутри димера GluN1/GluN2A (рис. 5b, c). Наблюдение выявило междимерную аллостерию. Аллостерический эффект проявляется в потере ~100 мкс и ~10 мкс кинетических фаз LBD апо-GluN1 при связывании Glu с LBD GluN2A внутри димера, аналогично наблюдаемому для связывания Gly с LBD GluN1. (рис. 5в). В контрольном эксперименте мы нанесли Glu на мономер GluN1-LBD-A480C-N521Y и не обнаружили никакого влияния на движения раскладушки (рис. 5d). Результат подтвердил, что остановка движения GluN1, вызванная связыванием Glu с LBD GluN2A, действительно была аллостерическим эффектом и не индуцировалась прямым взаимодействием Glu с LBD GluN1.

    Рис. 5: Аллостерическая связь динамики раскладушки в димерах NMDA iGluR LBD.

    a Дизайн репортерной системы, которая определяет влияние связывания агониста с LBD GluN2A на динамику LBD GluN1. Метка флуоресценции на LBD GluN1 показана красной сферой, а динамика раскладушки LBD — красной стрелкой. Связывание агониста Glu показано желтой стрелкой. b ACF, G(τ), нормализованное к среднему количеству молекул в фокусе детекции, записанное из LBD GluN1 внутри димера GluN1/GluN2A (оранжевые данные, GluN1-LBD-A480C-N521Y/GluN2A-LBD-E516Y ). ACF гетеродимера, измеренные в присутствии агониста Glu или Gly, показаны синим и голубым цветом соответственно. Черные линии соответствуют данным с использованием модели молекулярной диффузии, содержащей сумму от одного до трех одноэкспоненциальных распадов (указаны на панели ( с )). c Амплитуды (темные столбцы) и соответствующие постоянные времени (незакрашенные столбцы) экспоненциальных спадов АКФ, записанных для димера GluN1/GluN2A. Наборы данных и цветовой код соответствуют ACF, показанным на панели ( b ). Крестики (X) обозначают отсутствующую (не обнаруженную) кинетику. d ACF мономерного апо GluN1-LBD (конструкция A480C-N521Y), измеренные в отсутствие (красный) и в присутствии (синий) 1 мМ Glu. e ACF димера GluN1/GluN2A LBD, содержащего мутацию Y535S (конструкция GluN1-LBD-A480C-N521Y-Y535S/GluN2A-LBD-E516Y), измеренная в апо-состоянии (оранжевый), в присутствии Glu (синий) или при присутствии Gly (голубого). Черные линии соответствуют данным с использованием модели молекулярной диффузии, содержащей сумму двух или трех одноэкспоненциальных распадов (указаны на панели ( ф )). f Амплитуды (закрашенные столбцы) и соответствующие константы времени (незакрашенные столбцы) экспоненциального распада ACF, записанные для димера LBD GluN1/GluN2A, содержащего мутацию Y535S. Наборы данных и цветовой код соответствуют ACF, показанным на панели ( e ). Крест (X) обозначает отсутствующую (не обнаруженную) кинетику. Столбики погрешностей s.d. трех измерений ( n = 3).

    Изображение с полным размером

    Специфический тирозиновый остаток в LBD GluN1, Y535, расположенный на границе димеризации, играет важную роль в модулировании дезактивации рецептора 40 . Чтобы исследовать роль этого остатка в аллостерии динамики между GluN2A и GluN1 LBD, мы создали мутант GluN1, Y535S, который удаляет ароматическую боковую цепь 40 (конструкция GluN1-LBD-A480C-N521Y-Y535S). Мутация Y535S не влияла на динамику мономера моллюска, о чем свидетельствуют умеренные изменения динамики GluN1 LBD и сохранение остановки движений при связывании Gly (дополнительная рис. 5). Кинетика движений моллюсков димеров LBD GluN1/GluN2A, содержащих мутацию Y535S (GluN1-Y535S/GluN2A), также сохранялась (ср. рис. 5e, f и рис. 4b, d), показывая, что эта мутация не нарушала динамику димер. Более того, применение Gly к димеру GluN1-Y535S/GluN2A остановило кинетические фазы движения моллюска GluN1 длительностью ~100 мкс и ~10 мкс (рис. 5д, е). Это был тот же эффект, что и для димера GluN1/GluN2A без мутации Y535S (рис. 5b, c). Интересно, однако, что применение Glu к GluN1-Y535S/GluN2A практически не повлияло на движения моллюска GluN1 (рис. 5e, f), что отличалось от поведения GluN1/GluN2A без мутации Y535S (рис. 5b, в). Следовательно, делеция ароматической боковой цепи Y535 разъединяет передачу движений моллюска от GluN2A к GluN1 LBD, подчеркивая критическую роль Y535 в аллостерическом связывании NMDAR LBD.

    Обсуждение

    Множество структурных исследований iGluRs подтверждают модель, в которой связывание агониста с LBD стабилизирует конформацию с закрытой щелью, процесс, который в конечном счете вызывает открытие ворот канала 24 . Структурные исследования показывают, что амплитуда движения лепестков составляет порядка одного нанометра 28 . Быстрая миллисекундная кинетика 1 активации рецепторов указывает на то, что лежащие в основе движения моллюсков LBD должны иметь аналогичный временной масштаб. Моллюсковые движения изолированных доменов, как можно ожидать, будут даже быстрее, потому что меж- и внутрисубъединичные взаимодействия доменов внутри полноразмерных сборок iGluR будут замедлять динамику. Здесь мы использовали наносекундную FCS в сочетании с чувствительной к окружающей среде оксазиновой меткой для исследования динамики LBD в пространственном масштабе в один нанометр и во временном масштабе субмс. Мы обнаружили ярко выраженную мультиэкспоненциальную кинетику реконфигурации LBD в апо-состоянии, которое имело значительные амплитуды релаксации. Поскольку конформационный переход с двумя состояниями следует моноэкспоненциальному ходу времени 42 , количество экспонент суб-мс, обнаруженных с помощью FCS, можно интерпретировать как количество режимов конформационных изменений. Для LBD подтипов AMPA и NMDA мы обнаружили три режима движения, которые были на временной шкале от нс до мкс, тогда как каинатный LBD показал четыре режима движения. FCS измеряет равновесную кинетику, и одноэкспоненциальное затухание ACF можно интерпретировать как происходящее от одного термически активированного конформационного изменения вдоль определенной координаты реакции. В динамике белков порядок временных масштабов конформационных изменений обычно следует порядку рангов пространственных масштабов, на которых они происходят. Петлевые движения и движение вторичной структуры происходят во временном масштабе от нс до мкс, в то время как коллективные движения доменов происходят во временном масштабе от мкс до мс 43 . Моделирование молекулярной динамики, проведенное на NMDA iGluR LBD, предсказывает широкий спектр движений лепестков 44 : в моделировании были идентифицированы три основных компонента, которые классифицируются как изгибание шарнира, подметание и скручивание. Любопытно, что количество основных компонентов, выявленных при моделировании, совпадает с количеством экспонент, обнаруженных в наших экспериментах, что позволяет предположить, что наблюдаются одни и те же процессы. Моделирование также показывает расширенные конформации, отобранные с помощью LBD, за пределы того, что наблюдается в структурных исследованиях 25,44 . Спектроскопия smFRET обнаруживает гетерогенный ансамбль конформаций LBD GluA2, которые взаимопревращаются в масштабе времени ~ 100 мс 45 . Эта временная шкала более чем на три порядка медленнее, чем те, которые мы обнаружили здесь с помощью FCS. Расхождение предполагает, что природа конформационных переходов, обнаруженных smFRET и FCS, различна. Однако smFRET в сочетании с быстрой корреляционной спектроскопией обнаруживает быструю междоменную динамику между двумя верхними долями D1 в димерной сборке LBD из метаботропного рецептора глутамата (mGluR) 46 . Шкала времени 50-100 мкс, обнаруженная для междоменных движений D1-D1, согласуется с временными константами, обнаруженными здесь для внутрисубъединичных движений доли D1-D2 LBD iGluR. Интересно, что быстрая динамика D1-D1 была обнаружена в связанных с лигандом активных и покоящихся состояниях сборок mGluR LBD, что показывает, что связанные с лигандом домены остаются подвижными по отношению друг к другу 46 .

    Мы обнаружили, что связывание агонистов останавливало движения моллюсков суб-мс всех трех гомологов iGluR LBD, о чем свидетельствовало исчезновение экспоненциальных спадов в ACF (рис. 3). Быстрые, термически активируемые равновесные флуктуации в состояниях апо, обнаруженные с помощью FCS, указывают на механизм конформационного отбора связывания лиганда. Это также было сделано из результатов предыдущей спектроскопии smFRET субмс, проведенной на NMDA LBD 9.0017 47 . Мы наблюдали остаточные конформационные флуктуации в состояниях LBD, связанных с агонистом (рис. 3, 4). Они происходили в основном в сверхбыстром масштабе времени субмкс. Моделирование молекулярной динамики предсказывает остаточную гибкость в состояниях, связанных с агонистом, AMPA и NMDA LBD 23,25,44 , что согласуется с нашими результатами. ЯМР-исследования обнаруживают доказательства гибкости как в состоянии, связанном с апо, так и в состоянии, связанном с агонистом 48 .

    Мы обнаружили субмикросекундные флуктуации выраженной амплитуды в связанном с агонистом состоянии GluK1 LBD. Амплитуда была существенно выше по сравнению с амплитудами соответствующих распадов, наблюдаемых в LBD GluA2 и GluN1. Это открытие можно объяснить тем фактом, что сайт мечения флуорофора является частью расширенного сегмента петли GluK1, который на два остатка длиннее по сравнению с теми же сегментами в GluA2 и GluN1 и, таким образом, может обеспечивать дополнительную гибкость (рис. 1c).

    Мы обнаружили, что связывание полных агонистов AMPA и Glu оказывает практически неразличимое влияние на динамику LBD: оба агониста тормозят одни и те же режимы движения LBD GluA2 как в мономерном, так и в димерном состоянии. (рис. 4в). Это наблюдение можно объяснить сходством кристаллических структур LBD GluA2 в комплексе с Glu или AMPA 24 , что предполагает сходные способы действия. Связывание частичных агонистов с iGluR снижает амплитуды электрофизиологических сигналов по сравнению со связыванием полных агонистов, но механизм еще полностью не изучен 49 . Связывание частичных агонистов может приводить к более открытой конформации моллюсков LBD по сравнению со связыванием полных агонистов и, следовательно, может запускать ворота канала с меньшей вероятностью. Этот сценарий предложен структурными исследованиями ряда стерически сложных замещенных виллардиинов, связанных с LBD GluA2, которые постепенно обнаруживают более открытые домены 49 . Эксперименты smFRET, проведенные на LBD GluA2, показывают гетерогенный ансамбль структурных состояний, заселяемых при связывании виллардиинов 9.0017 50 , которые, похоже, имеют разные конформации. Альтернативная модель частичного агонизма предполагает, что более низкая стабильность комплекса LBD/частичный агонист снижает эффективность, несмотря на индукцию полностью закрытой раковины моллюска 51 . Третий сценарий может включать более высокую подвижность LBD, связанного с частичным агонистом, по сравнению с полным агонистом, что может привести к более низкой вероятности срабатывания ворот канала. Здесь мы обнаружили, что связывание частичных агонистов, таких как заменители виллардиинов, с LBD GluA2 дает идентичные динамические характеристики по сравнению со связыванием полных агонистов, таких как квисквалат, AMPA или Glu (рис. 3g, таблица 1). Результат подтверждает механизм, посредством которого различная стабильность или выбранные конформации LBD в комплексе с полными или частичными агонистами отвечают за различную эффективность.

    Мы наблюдали, что димеризация LBD приводит к увеличению постоянных времени движений моллюсков и уменьшению соответствующих кинетических амплитуд (рис. 4). Это разумно, потому что интерфейс димеризации покрывает шарнирную область раскладушки. Таким образом, димеризация будет ограничивать подвижность долей D1 и D2 относительно друг друга.

    Сборка LBD GluN1 и GluN2A в виде гетеродимеров позволила нам изучить аллостерические эффекты. Мы исследовали влияние связывания Glu с LBD GluN2A на динамику моллюсков LBD GluN1 внутри димера. К нашему удивлению, мы обнаружили, что связывание Glu с LBD GluN2A останавливало движения GluN1, подобно тому, как это делал Gly при непосредственном связывании с GluN1 (рис. 5). Ранее предполагалось, что связывание агониста с одной субъединицей LBD может стабилизировать закрытое состояние соседней субъединицы 9 без лиганда. 0017 52,53 . Именно это мы и наблюдали здесь. Далее мы обнаружили, что мутация Y535S, локализованная в шарнирной области LBD GluN1, отменяет аллостерический эффект: связывание Glu с LBD GluN2A в димере GluN1/GluN2A LBD, где ароматическая боковая цепь Y535 была делетирована, практически не оказывает никакого эффекта. на динамику LBD GluN1 (рис. 5). Боковая цепь Y535 в интерфейсе димеризации GluN1/GluN2A заполняет карман, который является мишенью аллостерических модуляторов гомологичного AMPA iGluR LBD 9.0017 40 . Электрофизиология показывает, что мутация Y535S ускоряет дезактивацию NMDA iGluRs и предполагается, что она служит сцеплением между LBD GluN1 и GluN2A 40 . Это предположение согласуется с нашими выводами, показывающими, что Y535 передает индуцированное связыванием лиганда торможение динамики от GluN2A LBD к GluN1 LBD. Исследования smFRET, проведенные на полноразмерных рецепторах, предполагают усиленное конформационное распространение и гибкость LBD GluN1, индуцированные связыванием Glu с GluN2A. Выводы основаны на распространении и уширении гистограмм smFRET, записанных от LBD GluN1 в рецепторе при применении Glu 9.0017 54 . Несоответствие между результатами smFRET и нашими результатами FCS может быть объяснено различными пространственными и временными масштабами, исследованными методами. FRET исследует глобальные конформационные изменения в масштабе 2–10 нм, в то время как контактно-индуцированное тушение активно в масштабе 1 нм 55 . Конформационные состояния, наблюдаемые на гистограммах smFRET, взаимопревращаются медленнее, чем мс, что присуще применяемому методу сбора данных, тогда как FCS обнаруживает быструю динамику на шкале времени нс-мс 31 . Таким образом, вполне вероятно, что разные конформационные подсостояния исследуются разными методами. Более того, поскольку эксперименты с smFRET проводились в контексте полноразмерного рецептора 54 , меж- и внутрисубъединичные взаимодействия меток внутри рецептора могут модулировать интенсивность их флуоресцентного излучения и вносить вклад в гетерогенность гистограмм smFRET. Однако моделирование молекулярной динамики, проведенное в том же исследовании, показывает, что связывание Glu с LBD GluN2A вызывает более закрытую конформацию расщелины LBD GluN1 54 , что согласуется с наблюдаемыми здесь остановленными движениями GluN1 LBD.

    Сообщается об отрицательной кооперативности Gly с Glu в NMDA iGluR 2,54,56 . Связывание Glu с GluN2A снижает сродство GluN1 к Gly 40 . Наши результаты предполагают механизм мобильности, лежащий в основе этого явления: связывание Glu с LBD GluN2A останавливает динамику LBD GluN1 через аллостерический путь с участием Y535. В рамках связывания агонистов посредством конформационного отбора сниженная гибкость LBD GluN1 ослабляет его сродство к Gly.

    Методы

    Мутагенез, синтез и флуоресцентная модификация белков

    ДНК-конструкции содержали гены, кодирующие Rattus norvegicus AMPA GluA2, каинат GluK1, NMDA GluN1 и NMDA GluN2A лиганд-связывающие доли S1 и Thr S2, линкер и N-концевой His 6 -tag в составе векторов экспрессии T7 pET22b(+) для конструкции GluA2, GluK1 и GluN1 и pET22b(+)-Sumo для конструкции GluN2A 40 . Одноточечные мутанты были созданы с использованием протокола мутагенеза QuikChange (Stratagene).

    LBD и их мутанты были сверхэкспрессированы в клетках Origami 2 (DE) (конструкции AMPA) или Origami B (DE3) (конструкции каината и NMDA) Escherichia coli (Novagen) с использованием системы экспрессии T7. После выращивания бактериальных клеток до OD 600 нм 2,0 в жидкой среде Terrific Broth (TB) (конструкции AMPA) или среде Луриа-Бертани (LB) (конструкции каината и NMDA), содержащей 100 мкг/мл ампициллина (конструкции AMPA) или 50 мкг/мл ампициллина и 12,5 мкг/мл тетрациклина (конструкции каината и NMDA), сверхэкспрессию индуцировали добавлением 0,4 мМ (конструкции AMPA) или 0,5 мМ (конструкции каината и NMDA) изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида (IPTG, Sigma — Олдрич). Затем клетки Origami B инкубировали при 15°C в течение 20 часов, тогда как клетки Origami 2 инкубировали при 18°C ​​в течение 20 часов. После лизиса ультразвуком His 6 -меченый белок выделяли из лизатов бактериальных клеток путем их загрузки на хроматографическую колонку Talon®Superflow™ (Sigma-Aldrich), уравновешенную 20 мМ Tris-HCl, pH 8,0, 300 мМ NaCl, 10 мМ имидазола, содержащего 1 мМ Моногидрат калиевой соли l-глутаминовой кислоты (Sigma-Aldrich) или глицин (Sigma-Aldrich) (конструкции каината и NMDA), или 20 мМ Трис-HCl, pH 8,0, 500 мМ NaCl, 20 мМ имидазол, содержащий L-глутаминовую кислоту моногидрат калиевой соли (конструкции AMPA). В случае каинатных и NMDA-конструкций смолу Talon®Superflow™ промывали, применяя градиент имидазола от 16  мМ до 32 мМ в уравновешивающем буфере. LBD элюировали со смолы, используя 20 мМ Tris-HCl, pH 8,0, 300 мМ NaCl, содержащую 250 мМ имидазола и 1 мМ моногидрат калиевой соли l-глутаминовой кислоты или глицин (конструкции каината и NMDA), или 20 мМ Tris-HCl, pH 8,0, 500 мМ NaCl, содержащий 500 мМ имидазола и 1 мМ моногидрат калиевой соли l-глутаминовой кислоты (конструкции AMPA). Элюат наносили на колонку для эксклюзионной хроматографии (SEC) (HiLoad 26/60 Superdex™ 75) (GE Healthcare) в 20 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, pH 7,5, содержащую 1 мМ моногидрат калиевой соли l-глутаминовой кислоты (AMPA). конструкции) или, для каинатных и NMDA-конструкций, подвергают диализу в буфере для анионообменной хроматографии (20 мМ трис-HCl, pH 8,5, 20 мМ NaCl, содержащий 1 мМ моногидрат калиевой соли 1-глутаминовой кислоты или глицин). Во время приготовления конструкций NMDA GluN2A LBD слитый белок сумо удаляли посредством протеолитического расщепления (сумопротеаза Ulp-1). В случае AMPA GluA2, каината GluK1 и NMDA GluN1 LBD, His 6 -tag удаляли протеолитическим расщеплением с использованием тромбина (Sigma-Aldrich). LBD дополнительно очищали с помощью анионообменной хроматографии (5 мл колонка HiTRap™ Q FF, GE Healthcare), применяя градиент от 20 мМ до 500 мМ NaCl в 20 мМ трис-HCl, рН 8,5, содержащем 1 мМ моногидрат калиевой соли 1-глутаминовой кислоты. или глицин. Объединенные фракции, содержащие LBD, концентрировали с использованием центробежного концентратора с молекулярной массой 10 кДа (Sartorius™ Vivaspin™ 20). Чистоту LBD подтверждали с помощью SDS-PAGE.

    Одноточечные мутанты Cys конструкций LBD были модифицированы с использованием тиол-реактивного малеимидного производного красителя AttoOxa11 (Atto-Tec). Мечение проводили в 20 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, pH 7,5, содержащем 1 мМ калиевой соли 1-глутаминовой кислоты или глицина и десятикратном молярном избытке восстанавливающего агента трис(2-карбоксиэтил)фосфина (TCEP, Sigma-Aldrich ). Применяли 15-кратный молярный избыток AttoOxa11 по сравнению с LBD. Реакцию мечения проводили в течение 3 ч при 4°С. Избыток красителя удаляли с помощью SEC на колонке Sephadex G-25 (GE Healthcare).

    Степень мечения (DOL) LBD определяли по сигналу УФ-поглощения белка и сигналу поглощения видимой области метки конъюгата в соответствии с инструкциями производителя (Atto-Tec):

    $${ {{{{{\rm{DOL}}}}}}}}=\frac{c({{{{{{\rm{dye}}}}}}}})}{c({{{{{{{ \rm{белок}}}}}}}})}=\frac{{A}_{{\max}}\cdot {\varepsilon}_{{{{{{{{\rm{prot}}}}}} }}}}{({A}_{280}-{A}_{{\max}}\cdot {{CF}}_{280})\cdot {\varepsilon}_{{\max}}} $$

    (1)

    где A max – сигнал поглощения конъюгата при максимуме длины волны красителя, ε prot – коэффициент экстинкции белка при 280 нм, A 280 – сигнал поглощения конъюгата при 280 нм, CF 280 — поправочный коэффициент метки, специфичный для красителя, который корректирует вклад красителя, а ε max — коэффициент экстинкции метки в максимуме длины волны.

    Эксперименты FCS

    Наносекундные FCS проводились на специально изготовленной установке конфокального флуоресцентного микроскопа с применением взаимной корреляции сигналов от двух оптоволоконных лавинных фотодиодных детекторов (Perkin Elmer, SPCM-AQRH-15-FC) для обхода неработающего детектора. -эффекты времени и постимпульса с использованием цифрового аппаратного коррелятора (цифровой реальный коррелятор ALV 5000/60×0 с множеством тау) 57 . Конструкции LBD измеряли в 50 мМ фосфата, рН 7,5, с доведением ионной силы до 200 мМ с использованием хлорида калия. Конструкции LBD GluN1/GluN2A измеряли в 20 мМ HEPES, pH 7,5, с доведением ионной силы до 150 мМ с использованием хлорида натрия. 0,05 % Tween-20 (Sigma-Aldrich) и 0,3 мг/мл альбумина бычьей сыворотки (BSA, Sigma-Aldrich) использовали в качестве буферных добавок для подавления проникновения на поверхность стекла. АКФ регистрировались ок. 1 нМ флуоресцентно модифицированные образцы LBD. Для экспериментов, связанных с димеризацией LBD, к флуоресцентно модифицированной конструкции LBD добавляли избыток обычно 40 мкМ немеченой конструкции LBD. В исследованиях связывания агонистов перед измерением к образцам добавляли 1 мМ агониста. Все измерения проводились при 25 °C. Точный контроль температуры был достигнут с помощью изготовленного на заказ нагревателя объектива. Все образцы были отфильтрованы с помощью шприцевого фильтра с размером пор 0,2 мкм и перед измерениями перенесены на покровное стекло высокой точности. Для каждой экспериментальной установки регистрировали по три АКФ от одного образца ( 9{-1}$$

    (2)

    N – среднее число молекул в фокусе детектирования, а \({{{{{{\rm{\tau }}}}}}}_{{{ {{{\rm{D}}}}}}}\) представляет постоянную времени диффузии. Применение модели диффузии в двух измерениях имело достаточную точность, поскольку два горизонтальных размера ( x , y ) фокуса детектирования были намного меньше поперечного размера ( х ) в применяемой установке.

    АКФ, содержащие дополнительные распады на шкале субмс, были описаны суммой одинарных экспонент с использованием расширенной аналитической модели 9{-1}\left(1+\mathop{\sum}\limits _{{{n}}}{{{a}}}_{{{n}}}\exp \left(-\frac{\ tau }{{\tau }_{n}}\right)\right)$$

    (3)

    , где a n обозначает амплитуду, а \({{{{{{\rm {\tau }}}}}}}_{{{n}}}\) постоянная времени n -го распада.

    В этой модели изменение между флуоресцентной и гасящей флуоресценцию конформацией описывается двухуровневым равновесием, кинетика которого соответствует моноэкспоненциальному затуханию. Амплитуда и постоянная времени экспоненты содержат микроскопические константы скорости включения/выключения флуоресценции. Несколько независимых конформационных релаксаций с двумя состояниями описываются суммой экспонент. Микроскопический анализ констант скорости усложняется тем, что амплитуда распада также модулируется яркостью состояний 31 .

    Значения τ D были преобразованы в R h с использованием уравнения Стокса-Эйнштейна 41 . Для калибровки установки мы измерили τ D флуорофора Atto655 в качестве эталона, для которого известен коэффициент диффузии и, следовательно, R h 59 . Для сравнения, радиусы вращения ( R г ) LBD были рассчитаны из доступных кристаллических структур с использованием PyMOL (pymol. org). Значения R h вычислены из R g с использованием теоретического закона подобия для монодисперсной сферы 60 :

    $${R}_{h}=\frac{1}{\sqrt{3 /5}}\cdot {R}_{g}$$

    (4)

    Для определения значений K d из амплитуд релаксации FCS, построенных в зависимости от концентрации агониста, мы применили модель для белка изотерма связывания -лиганда (P + L = PL) 61 :

    $$\left[PL\right]=\frac{{[P]}_{t}[L]}{\left[L\right ]+{K}_{d}}$$

    (5)

    где [PL] — концентрация комплекса белок-лиганд, [P] t — общая концентрация флуоресцентно модифицированного белка, [L] — концентрация лиганда. Изменение амплитуды релаксации FCS 90 147 a 90 148 моделировалось как:

    $$\frac{a-{a}_{u}}{{a}_{b}-{a}_{u}}=\ frac{[L]}{\left[L\right]+{K}_{d}}$$

    (6)

    где a — наблюдаемая амплитуда, a u — амплитуда в несвязанном состоянии и a b – амплитуда в связанном состоянии.

    Сводка отчета

    Дополнительную информацию о дизайне исследования можно найти в Сводке отчета об исследовании природы, связанной с этой статьей.

    Доступность данных

    Данные, подтверждающие результаты этого исследования, можно получить у соответствующего автора по обоснованному запросу. Исходные данные фигур доступны в качестве дополнительных данных.

    Ссылки

    1. Traynelis, S. F. et al. Ионные каналы глутаматных рецепторов: структура, регуляция и функция. Фарм. 62 , 405–496 (2010).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    2. Erreger, K., Chen, P.E., Wyllie, D.J. & Traynelis, S.F. Управление глутаматными рецепторами. Крит. Преподобный Нейробиол. 16 , 187–224 (2004).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    3. Грегер И. Х. и Майер М. Л. Структурная биология ионных каналов глутаматных рецепторов: к пониманию механизма. Курс. мнение Структура биол. 57 , 185–195 (2019).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    4. Stern-Bach, Y. et al. Агонистическая селективность глутаматных рецепторов определяется двумя доменами, структурно родственными бактериальным белкам, связывающим аминокислоты. Нейрон 13 , 1345–1357 (1994).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    5. Каракас, Э., Риган, М.С. и Фурукава, Х. Новое структурное понимание функции ионотропных рецепторов глутамата. Тренды Биохим. науч. 40 , 328–337 (2015).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    6. Zhu, S. & Gouaux, E. Структура и симметрия определяют принципы работы ионотропных рецепторов глутамата. Нейрофармакология 112 , 11–15 (2017).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    7. Соболевский А.И., Роскони М.П. и Гуо Э. Рентгеновская структура, симметрия и механизм рецептора глутамата подтипа AMPA. Природа 462 , 745–756 (2009).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    8. Herguedas, B. et al. Структура и организация гетеромерных рецепторов глутамата AMPA-типа. Наука 352 , aad3873 (2016).

      ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

    9. Herguedas, B. et al. Архитектура гетеромерного рецептора GluA1/2 AMPA в комплексе со вспомогательной субъединицей TARP gamma8. Наука 364 , eaav9011 (2019).

    10. Durr, K.L. et al. Структура и динамика АМРА-рецептора GluA2 в состоянии покоя, предоткрытом и десенсибилизированном состояниях. Cell 158 , 778–792 (2014).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    11. Туми, Э. К., Елшанская, М. В., Грассуччи, Р. А., Франк, Дж. и Соболевский, А. И. Открытие каналов и механизм ворот в рецепторах глутамата подтипа AMPA. Природа 549 , 60–65 (2017).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    12. Чжан, Д., Уотсон, Дж. Ф., Мэтьюз, П. М., Кэйс, О. и Грегер, И. Х. Гейтирование и модуляция гетерооктамерного рецептора глутамата AMPA. Природа 594 , 454–458 (2021).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    13. Lee, C.H. et al. Структуры рецепторов NMDA показывают расположение субъединиц и архитектуру пор. Природа 511 , 191–197 (2014).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    14. Zhu, S. et al. Механизм ингибирования и активации NMDA-рецепторов. Cell 165 , 704–714 (2016).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    15. Lu, W., Du, J., Goehring, A. & Gouaux, E. Крио-ЭМ структуры тригетеромерного рецептора NMDA и его аллостерическая модуляция. Наука 355 , eaal3729 (2017).

    16. Джалали-Язди Ф., Чоудхури С., Йошиока С. и Гуо Э. Механизмы ингибирования цинком и протонами рецептора GluN1/GluN2A NMDA. Cell 175 , 1520–1532 e1515 (2018).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    17. Каракас Э. и Фурукава Х. Кристаллическая структура ионного канала гетеротетрамерного рецептора NMDA. Наука 344 , 992–997 (2014).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    18. Чоу, Т. Х., Таджима, Н., Ромеро-Эрнандес, А. и Фурукава, Х. Структурная основа функциональных переходов в рецепторах NMDA млекопитающих. Cell 182 , 357–371 e313 (2020).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    19. Маклин, Д. М., Дарем, Р. Дж. и Джаяраман, В. Картирование конформационного ландшафта глутаматных рецепторов с использованием одиночной молекулы FRET. Тренды Неврологии. 42 , 128–139 (2019).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    20. Освальд, Р. Э. Гибкость глутамат-связывающего домена. Структура 15 , 1157–1158 (2007).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    21. Армстронг Н. и Гуо Э. Механизмы активации и антагонизма AMPA-чувствительного рецептора глутамата: кристаллические структуры ядра, связывающего лиганд GluR2. Нейрон 28 , 165–181 (2000).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    22. Лау, А. Ю. и Ру, Б. Ландшафты свободной энергии, управляющие конформационными изменениями в лиганд-связывающем домене рецептора глутамата. Структура 15 , 1203–1214 (2007).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    23. Zhang, W., Robert, A., Vogensen, S.B. & Howe, J.R. Взаимосвязь между активностью агониста и кинетикой рецептора AMPA. Биофиз. J. 91 , 1336–1346 (2006).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    24. Армстронг, Н., Джасти, Дж., Бейх-Франдсен, М. и Гуо, Э. Измерение конформационных изменений, сопровождающих десенсибилизацию в ионотропном рецепторе глутамата. Cell 127 , 85–97 (2006).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    25. Кумар, Дж. и Майер, М.Л. Функциональные выводы из структур ионных каналов глутаматных рецепторов. Год. Преподобный Физиол. 75 , 313–337 (2013).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    26. Дженсен, М. Х., Сукумаран, М., Джонсон, К. М., Грегер, И. Х. и Нойвейлер, Х. Внутренние движения в N-концевом домене ионотропного рецептора глутамата, обнаруженные с помощью флуоресцентной корреляционной спектроскопии. Дж. Мол. биол. 414 , 96–105 (2011).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    27. Дуз, С., Нойвайлер, Х. и Зауэр, М. Тушение флуоресценции фотоиндуцированным переносом электрона: репортер конформационной динамики макромолекул. ChemPhysChem 10 , 1389–1398 (2009).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    28. Sauer, M. & Neuweiler, H. PET-FCS: исследование быстрых структурных колебаний белков и нуклеиновых кислот путем тушения флуоресценции одной молекулы. Методы Мол. биол. 1076 , 597–615 (2014).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    29. Марме, Н., Кнемейер, Дж. П., Зауэр, М. и Вольфрум, Дж. Тушение меж- и внутримолекулярной флуоресценции органических красителей триптофаном. Биоконъюгат Хим. 14 , 1133–1139 (2003).

      КАС Статья Google ученый

    30. Abele, R., Keinanen, K. & Madden, D.R. Индуцированная агонистами изомеризация в лиганд-связывающем домене рецептора глутамата. Кинетический и мутагенетический анализ. Дж. Биол. хим. 275 , 21355–21363 (2000).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    31. Джин, Р., Хорнинг, М., Майер, М.Л. и Гуо, Э. Механизм активации и селективности в лиганд-управляемом ионном канале: структурные и функциональные исследования GluR2 и квасквалата. Биохимия 41 , 15635–15643 (2002).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    32. Сакакура, М. и др. Структурные механизмы, лежащие в основе изменений активности рецептора глутамата AMPA-типа, вызванных заменами в его лиганд-связывающем домене. Строение 27 , 1698–1709 e1695 (2019).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    33. Kiyonaka, S. et al. Направленная лигандом химия рецепторов AMPA обеспечивает флуоресцентные биосенсоры живых клеток. ACS Хим. биол. 13 , 1880–1889 (2018).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    34. Deming, D., Cheng, Q. & Jayaraman, V. Является ли изолированный лиганд-связывающий домен хорошей моделью домена в нативном рецепторе? Дж. Биол. хим. 278 , 17589–17592 (2003 г.).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    35. Yao, Y. & Mayer, M.L. Характеристика растворимого лиганд-связывающего домена регуляторной субъединицы рецептора NMDA NR3A. J. Neurosci. 26 , 4559–4566 (2006).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    36. Furukawa, H., Singh, S.K., Mancusso, R. & Gouaux, E. Расположение и функция субъединиц в рецепторах NMDA. Природа 438 , 185–192 (2005).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    37. Teufel, D.P., Johnson, C.M., Lum, J.K. & Neuweiler, H. Вызванный позвоночником коллапс в развернутых белковых цепях. Дж. Мол. биол. 409 , 250–262 (2011).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    38. Fersht, A. R. Structure and Mechanism in Protein Science (Freeman, 1999).

    39. Хенцлер-Вилдман К. и Керн Д. Динамические свойства белков. Природа 450 , 964–972 (2007).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    40. Yao, Y., Belcher, J., Berger, A.J., Mayer, M.L. & Lau, A.Y. Конформационный анализ лиганд-связывающих доменов GluN1, GluN2 и GluN3 рецепторов NMDA выявил специфические для подтипа характеристики. Структура 21 , 1788–1799 (2013).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    41. Ландес, С. Ф., Рамбхадран, А., Тейлор, Дж. Н., Салатан, Ф. и Джаяраман, В. Структурный ландшафт изолированных агонист-связывающих доменов из отдельных рецепторов AMPA. Нац. хим. биол. 7 , 168–173 (2011).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    42. Olofsson, L. et al. Тонкая настройка субмиллисекундной конформационной динамики контролирует эффективность агонистов метаботропных рецепторов глутамата. Нац. коммун. 5 , 5206 (2014).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    43. Долино, Д. М., Резаи Адариани, С., Шейх, С. А., Джаяраман, В. и Санабрия, Х. Конформационный отбор и субмиллисекундная динамика лиганд-связывающего домена рецептора N-метил-d-аспартата. Дж. Биол. хим. 291 , 16175–16185 (2016).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    44. Ahmed, A.H., Loh, A.P., Jane, D.E. & Oswald, R.E. Динамика глутамат-связывающего домена S1S2 GluR2, измеренная с помощью 19F ЯМР-спектроскопии. Дж. Биол. хим. 282 , 12773–12784 (2007).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    45. Джин, Р., Банке, Т. Г., Майер, М. Л., Трайнелис, С. Ф. и Гуо, Э. Структурная основа частичного агонистического действия на ионотропные рецепторы глутамата. Нац. Неврологи. 6 , 803–810 (2003).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    46. Рамасвами, С. и др. Роль конформационной динамики в частичном агонизме рецептора альфа-амино-3-гидрокси-5-метилизоксазол-4-пропионовой кислоты (АМРА). Дж. Биол. хим. 287 , 43557–43564 (2012).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    47. Ахмед, А. Х., Ван, С., Чуанг, Х. Х. и Освальд, Р. Э. Механизм активации рецептора AMPA частичными агонистами: дисульфидное улавливание конформаций с закрытыми лепестками. Дж. Биол. хим. 286 , 35257–35266 (2011).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    48. Paas, Y. Макро- и микроархитектуры лиганд-связывающего домена рецепторов глутамата. Тренды Неврологии. 21 , 117–125 (1998).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    49. Paas, Y., Eisenstein, M., Medevielle, F., Teichberg, V.I. & Devillers-Thiery, A. Идентификация подмножеств аминокислот, отвечающих за специфичность связывания лиганда рецептором глутамата. Нейрон 17 , 979–990 (1996).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    50. Durham, R. J. et al. Конформационное распространение и динамика аллостерии NMDA-рецепторов. Проц. Натл акад. науч. США 117 , 3839–3847 (2020).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    51. Шулер, Б. и Хофманн, Х. Спектроскопия одиночных молекул динамики сворачивания белков — расширение масштабов и временных масштабов. Курс. мнение Структура биол. 23 , 36–47 (2013).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    52. Бенвенист М., Клементс Дж., Выклицкий Л. мл. и Майер М. Л. Кинетический анализ модуляции рецепторов N-метил-D-аспарагиновой кислоты глицином в культивируемых нейронах гиппокампа мыши. J. Physiol. 428 , 333–357 (1990).

      КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

    53. Рис, Дж., Шварце, С., Джонсон, С.М. и Нойвейлер, Х. Микросекундная укладка и доменные движения структурного переключателя белка шелка паука. Дж. Ам. хим. соц. 136 , 17136–17144 (2014).

      КАС пабмед Статья Google ученый

    54. Кричевский О. и Боннет Г. Корреляционная спектроскопия флуоресценции: метод и его применение. Рем. прог. физ. (Великобритания) 65 , 251–297 (2002).

      КАС Статья Google ученый

    55. Muller, C.B. et al. Точное измерение диффузии с помощью многоцветной двухфокусной флуоресцентной корреляционной спектроскопии. Epl—Europhys. лат. 83 , 46001 (2008 г.).

    56. Burchard, W., Schmidt, M. & Stockmayer, WH Информация о полидисперсности и разветвлениях от комбинированного квазиупругого и интегрального рассеяния. Макромолекулы 13 , 1265–1272 (1980).

      КАС Статья Google ученый

    57. Hulme, E.C. & Trevethick, M.A. Анализы связывания лигандов в равновесии: проверка и интерпретация. Брит. Дж. Фарм. 161 , 1219–1237 (2010).

      КАС Статья Google ученый

    Ссылки на скачивание

    Благодарности

    Авторы благодарят Hiro Furukawa за предоставление плазмид для гетерологичной экспрессии LBD GluN1 и GluN2A. Эта публикация была поддержана Фондом публикаций открытого доступа Вюрцбургского университета.

    Финансирование

    Финансирование открытого доступа организовано и разрешено Projekt DEAL.

    Информация об авторе

    Авторы и организации

    1. Кафедра биотехнологии и биофизики, Университет Юлиуса-Максимилиана, Вюрцбург, Вюрцбург, Германия

      Suhaila Rajab, Leah Bismin, Simone Schwarze & Hannes Neuweiler

    2. Отдел нейробиологии, Лаборатория медицинских исследований молекулярной биологии, Cambridge, UK

      Alexandra Pinggera & Ingo H. Greger

    111111117779777977977.J.J.J.J.J.J.J.J.JALORSHIORS и Ingo H. GREGER

    .

    Посмотреть публикации автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  • Лия Бисмин

    Посмотреть публикации автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  • Simone Schwarze

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  • Alexandra Pinggera

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  • Ingo H. Greger

    Посмотреть публикации автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  • Hannes Neuweiler

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  • Contributions

    S.R., S.S., I.H.G. и HN разработали эксперименты. С.Р., С.С., Л.Б. и А.П. проводили эксперименты. С.Р., С.С. и Л.Б. проанализированные данные. Статью написали С. Р., А. П., И. Х. Г. и Х. Н..

    Автор, ответственный за переписку

    Связь с Ханнес Нойвейлер.

    Заявление об этике

    Конкурирующие интересы

    Авторы не заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

    Дополнительная информация

    Информация о рецензировании Биология коммуникаций благодарит Роберта Кваста и других анонимных рецензентов за их вклад в рецензирование этой работы. Основные редакторы обработки: Кришнананда Чаттопадхьяй и Анам Ахтар. Доступны отчеты рецензентов.

    Примечание издателя Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и ​​институциональной принадлежности.

    Дополнительная информация

    Прозрачный файл рецензирования

    Дополнительная информация

    Описание дополнительных файлов

    Дополнительные данные 1

    . Соглашение

    101010101010101001010101010 гг.0011

    Открытый доступ Эта статья находится под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 International License, которая разрешает использование, совместное использование, адаптацию, распространение и воспроизведение на любом носителе или в любом формате при условии, что вы укажете автора(ов) оригинала. и источник, предоставьте ссылку на лицензию Creative Commons и укажите, были ли внесены изменения. Изображения или другие сторонние материалы в этой статье включены в лицензию Creative Commons для статьи, если иное не указано в кредитной строке материала. Если материал не включен в лицензию Creative Commons статьи, а ваше предполагаемое использование не разрешено законом или выходит за рамки разрешенного использования, вам необходимо получить разрешение непосредственно от правообладателя. Чтобы просмотреть копию этой лицензии, посетите http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.

    Перепечатка и разрешения

    Об этой статье

    Комментарии

    Отправляя комментарий, вы соглашаетесь соблюдать наши Условия и правила сообщества. Если вы обнаружите что-то оскорбительное или не соответствующее нашим условиям или правилам, отметьте это как неприемлемое.

    Механизм диссоциации процессивных целлюлаз

    1. Payne C.M., et al., Fungal Cellulases. хим. преп. 115, 1308–1448 (2015). [PubMed] [Google Scholar]

    2. Крэгг С. М. и др., Механизмы деградации лигноцеллюлозы на древе жизни. Курс. мнение хим. биол. 29, 108–119 (2015). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    3. Клемм Д., Хойблейн Б. , Финк Х. П., Бон А., Целлюлоза: увлекательный биополимер и устойчивое сырье. Ангью. хим. Междунар. Эд. англ. 44, 3358–3393 (2005). [PubMed] [Google Scholar]

    4. Вольфенден Р. Степени сложности водопотребляющих реакций в отсутствие ферментов. хим. преп. 106, 3379–3396 (2006). [PubMed] [Google Scholar]

    5. Chundawat S.P.S., Beckham G.T., Himmel M.E., Dale B.E., Разложение лигноцеллюлозной биомассы на топливо и химикаты. Анну. Преподобный Хим. биомол. англ. 2, 121–145 (2011). [PubMed] [Академия Google]

    6. Химмель М. Е. и др., Устойчивость биомассы: Инженерные установки и ферменты для производства биотоплива. Наука 315, 804–807 (2007). [PubMed] [Google Scholar]

    7. Wolfenden R., Lu X., Young G., Спонтанный гидролиз гликозидов. Варенье. хим. соц. 120, 6814–6815 (1998). [Google Scholar]

    8. Ким С., Дейл Б. Е. Распределенная система биопереработки целлюлозы на Среднем Западе США на основе кукурузной соломы. Биотопливо Биопрод. Биорефин. 10, 819–832 (2016). [Академия Google]

    9. Wilson D.B. Целлюлазы и биотопливо. Курс. мнение Биотехнолог. 20, 295–299 (2009). [PubMed] [Google Scholar]

    10. Дейл Б., Время переосмыслить целлюлозное биотопливо? Биотопливо Биопрод. Биорефин. 12, 5–7 (2018). [Google Scholar]

    11. Вальдивия М., Галан Дж. Л., Лаффарга Дж., Рамос Дж. Л., Биотопливо 2020: Биоперерабатывающие заводы на основе лигноцеллюлозных материалов. микроб. Биотехнолог. 9, 585–594 (2016). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    12. Перальта-Яхья П. П., Чжан Ф., дель Кардайр С. Б., Кислинг Дж. Д., Микробиологическая инженерия для производства современного биотоплива. Природа 488, 320–328 (2012). [PubMed] [Академия Google]

    13. Серрано-Руис Дж. К., Думесик Дж. А., Каталитические пути преобразования биомассы в жидкие углеводородные транспортные топлива. Энергетическая среда. науч. 4, 83–99 (2011). [Google Scholar]

    14. Momeni M.H., et al., Структурная, биохимическая и компьютерная характеристика семейства гликозидгидролаз 7, целлобиогидролазы гриба-убийцы деревьев Heterobasidion corrective . Дж. Биол. хим. 288, 5861–5872 (2013). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    15. Ялак Й., Курашин М., Теугьяс Х., Вялямяэ П., Эндо-экзосинергизм в гидролизе целлюлозы. Дж. Биол. хим. 287, 28802–28815 (2012). [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]

    16. Курасин М., Вялямяэ П. Процессивность целлобиогидролаз ограничена субстратом. Дж. Биол. хим. 286, 169–177 (2011). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    17. Cruys-Bagger N., Tatsumi H., Ren G.R., Borch K., West P., Переходная кинетика и этапы ограничения скорости для процессивной целлобиогидролазы Cel7A: Влияние структуры субстрата и углеводсвязывающего домена. Биохимия 52, 8938–8948 (2013). [PubMed] [Google Scholar]

    18. Накамура А. и др. Компромисс между процессивностью и гидролитической скоростью целлобиогидролаз на поверхности кристаллической целлюлозы. Варенье. хим. соц. 136, 4584–4592 (2014). [PubMed] [Google Scholar]

    19. Kipper K., Väljamäe P., Johansson G. Процессуальное действие целлобиогидролазы Cel7A из Trichoderma reesei проявляется в виде кинетики «взрыва» на флуоресцентных полимерных модельных субстратах. Биохим. Дж. 385, 527–535 (2005). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    20. Ståhlberg J., Johansson G., Pettersson G., Trichoderma reesei не имеет настоящей экзоцеллюлазы: все интактные и укороченные целлюлазы продуцируют новые редуцирующие концевые группы на целлюлозе. Биохим. Биофиз. Акта 1157, 107–113 (1993). [PubMed] [Google Scholar]

    21. Schiano-di-Cola C., et al., Систематические делеции в целлобиогидролазе (CBH) Cel7A гриба Trichoderma reesei обнаруживают гибкие петли, критически важные для активности CBH. Дж. Биол. хим. 294, 1807–1815 (2019 г.)). [Статья бесплатно PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    22. Бадино С.Ф. и др., Экзо-экзосинергия между Cel6A и Cel7A из Hypocrea jecorina : Роль модуля связывания углеводов и эндолитический характер ферменты. Биотехнолог. биоинж. 114, 1639–1647 (2017). [PubMed] [Google Scholar]

    23. Нотт Б. С., Кроули М. Ф., Химмель М. Э., Стольберг Дж., Бекхэм Г. Т., Взаимодействия углеводов и белков, которые управляют транслокацией полисахаридов в ферментах, выявленные в результате компьютерного исследования процессивности целлобиогидролазы. Варенье. хим. соц. 136, 8810–8819(2014). [PubMed] [Google Scholar]

    24. Knott B.C., et al., Механизм гидролиза целлюлозы с помощью двухстадийной удерживающей целлобиогидролазы, выясненный путем изучения структурных и переходных путей. Варенье. хим. соц. 136, 321–329 (2014). [PubMed] [Google Scholar]

    25. Кошланд Д. Э. мл. Стереохимия и механизм ферментативных реакций. биол. Преподобный Кэмб. Филос. соц. 28, 416–436 (1953). [Google Scholar]

    26. Bu L., et al., Изучение вытеснения углеводного продукта из процессивной целлюлазы с помощью нескольких методов абсолютной связывающей свободной энергии. Дж. Биол. хим. 286, 18161–18169(2011). [Статья бесплатно PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    27. Kari J., et al., Кинетика вариантов целлобиогидролазы (Cel7A) с пониженным сродством к субстрату. Дж. Биол. хим. 289, 32459–32468 (2014). [Статья бесплатно PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    28. Cruys-Bagger N., et al., Предустановившаяся кинетика гидролиза нерастворимой целлюлозы целлобиогидролазой Cel7A. Дж. Биол. хим. 287, 18451–18458 (2012). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    29. Igarashi K., et al., Пробки снижают гидролитическую эффективность целлюлазы на поверхности целлюлозы. Наука 333, 1279–1282 (2011). [PubMed] [Google Scholar]

    30. Vermaas J. V., et al., Механизм ингибирования лигнином ферментативной деконструкции биомассы. Биотехнолог. Биотопливо 8, 217 (2015). [Статья бесплатно PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    31. Shibafuji Y., et al., Одномолекулярный анализ элементарных стадий реакции Trichoderma reesei целлобиогидролазы I (Cel7A), гидролизующей кристаллическую целлюлозу I α и III I . Дж. Биол. хим. 289, 14056–14065 (2014). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    32. Соренсен Т. Х., Крюйс-Баггер Н., Борх К., Вест П. Диаграмма свободной энергии для гетерогенного ферментативного гидролиза гликозидных связей в целлюлозе. Дж. Биол. хим. 290, 22203–22211 (2015). [Статья бесплатно PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    33. Jalak J., Väljamäe P., Механизм начального быстрого замедления скорости гидролиза целлюлозы, катализируемого целлобиогидролазой. Биотехнолог. биоинж. 106, 871–883 (2010). [PubMed] [Google Scholar]

    34. Cruys-Bagger N., Elmerdahl J., Praestgaard E., Borch K., West P., Теория стационарного состояния процессивных целлюлаз. ФЕБС Дж. 280, 3952–3961 (2013). [PubMed] [Google Scholar]

    35. Шультен К., Шультен З., Сабо А., Динамика реакций при пересечении диффузионного барьера. Дж. Хим. физ. 74, 4426–4432 (1981). [Google Scholar]

    36. Ståhlberg J., Knott B.C., запись PDB 6RWF. Банк данных о белках. https://www.rcsb.org/structure/6RWF. Депонировано 4 июня 2019 г.

    37. Курашин М., Кууск С., Кууск П., Сорли М., Вялямяэ П., Медленные скорости диссоциации и сильное связывание продукта необходимы для процессивности и эффективного разложения неподатливого хитина семейством 18. хитиназы. Дж. Биол. хим. 290, 29074–29085 (2015). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    38. Kont R., Kari J., Borch K., Westh P., Väljamäe P., Междоменный синергизм необходим для эффективной подачи целлюлозной цепи в активную сайт целлобиогидролазы Cel7A. Дж. Биол. хим. 291, 26013–26023 (2016). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    39. Sørensen T.H., et al., Варианты петли термофила Rasamsonia emersonii Cel7A с улучшенной активностью против целлюлозы. Биотехнолог. биоинж. 114, 53–62 (2017). [PubMed] [Академия Google]

    40. Vermaas J.V., Crowley M.F., Beckham G.T., Payne C.M. Влияние окисления литического полисахарида монооксигеназой на структуру целлюлозы и связывание олигомеров окисленной целлюлозы с целлюлазами. Дж. Физ. хим. Б 119, 6129–6143 (2015). [PubMed] [Google Scholar]

    41. Silveira R.L., Skaf M.S. Молекулярно-динамическое моделирование мутантов целлобиогидролазы семейства 7, направленное на снижение ингибирования продукта. Дж. Физ. хим. Б 119, 9295–9303 (2015). [PubMed] [Академия Google]

    42. Сильвейра Р.Л., Скаф М. С., Согласованные движения и крупномасштабные структурные колебания целлобиогидролазы Trichoderma reesei Cel7A. физ. хим. хим. физ. 20, 7498–7507 (2018). [PubMed] [Google Scholar]

    43. Brady S.K., Sreelatha S., Feng Y., Chundawat S.P.S., Lang M.J., Целлобиогидролаза 1 из Trichoderma reesei расщепляет целлюлозу за один шаг. Нац. коммун. 6, 10149 (2015). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    44. Beckham G.T., et al., К теории молекулярного уровня процессивности углеводов в гликозидгидролазах. Курс. мнение Биотехнолог. 27, 96–106 (2014). [PubMed] [Google Scholar]

    45. Лютербахер Дж. С., Уокер Л. П., Моран-Мирабаль Дж. М., Наблюдение и моделирование деградации BMCC с помощью коммерческих коктейлей целлюлаз с флуоресцентно меченым Trichoderma reseii Cel7A с помощью конфокальной микроскопии. Биотехнолог. биоинж. 110, 108–117 (2013). [PubMed] [Google Scholar]

    46. Kari J., et al., Аномерная селективность и профиль продукта процессивной целлюлазы. Биохимия 56, 167–178 (2017). [PubMed] [Академия Google]

    47. Westh P., et al., Термоактивация целлобиогидролазы. Биотехнолог. биоинж. 115, 831–838 (2018). [PubMed] [Google Scholar]

    48. Igarashi K., et al., Высокоскоростная атомно-силовая микроскопия визуализирует процессное движение Trichoderma reesei целлобиогидролазы I на кристаллической целлюлозе. Дж. Биол. хим. 284, 36186–36190 (2009). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    49. Нидецкий Б., Захария В., Геркен Г., Хайн М., Штайнер В., Гидролиз целлоолигосахаридов с помощью1363 Trichoderma reesei целлобиогидролазы: экспериментальные данные и кинетическое моделирование. Ферментный микроб. Технол. 16, 43–52 (1994). [Google Scholar]

    50. Harjunpää V., et al., Гидролиз целлоолигосахаридов целлобиогидролазой II из Trichoderma reesei . Константы ассоциации и скорости, полученные на основе анализа кривых прогресса. Евро. Дж. Биохим. 240, 584–591 (1996). [PubMed] [Google Scholar]

    51. Рабинович М. Л., Мельник М. С., Хернер М. Л., Возный Ю. В., Васильченко Л. Г. Преимущественное непродуктивное связывание субстрата грибковой целлобиогидролазой I и последствия для улучшения активности. Биотехнолог. Дж. 14, e1700712 (2019 г.). [PubMed] [Google Scholar]

    52. Кари Дж. и др. Принцип Сабатье для межфазного (гетерогенного) ферментативного катализа. Катал. 8, 11966–11972 (2018). [Google Scholar]

    53. von Ossowski I., et al., Разработка экзо-петли целлобиогидролазы Trichoderma reesei , Cel7A. Сравнение с Phanerochaete chrysosporium Cel7D. Дж. Мол. биол. 333, 817–829 (2003). [PubMed] [Google Scholar]

    54. Чжан С., Ирвин Д. К., Уилсон Д. Б., Сайт-направленная мутация некаталитических остатков Thermobifida fusca экзоцеллюлаза Cel6B. Евро. Дж. Биохим. 267, 3101–3115 (2000). [PubMed] [Google Scholar]

    55. Бекхэм Г. Т. и др. Происхождение непокорности биомассы на молекулярном уровне: свободные энергии декристаллизации для четырех распространенных полиморфов целлюлозы. Дж. Физ. хим. Б 115, 4118–4127 (2011). [PubMed] [Google Scholar]

    56. Payne C.M., et al., Процессивность гликозидгидролазы напрямую связана со свободной энергией связывания олигосахаридов. Варенье. хим. соц. 135, 18831–18839 гг.(2013). [PubMed] [Google Scholar]

    57. Брандт А., Грасвик Дж., Халлетт Дж. П., Велтон Т., Деконструкция лигноцеллюлозной биомассы с помощью ионных жидкостей. Зеленый хим. 15, 550–583 (2013). [Google Scholar]

    58. Хорн С. Дж. и др. Затраты и преимущества процессивности при ферментативной деградации неподатливых полисахаридов. проц. Натл. акад. науч. США. 103, 18089–18094 (2006). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    59. Брукс Б. Р. и др., CHARMM: Программа биомолекулярного моделирования. Дж. Комп. хим. 30, 1545–1614 (2009 г.)). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    60. Phillips J.C., et al., Масштабируемая молекулярная динамика с NAMD. Дж. Комп. хим. 26, 1781–1802 (2005). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    61. День А. и др., «Вариант целлюлазы Hypocrea jecorina CBh2». Патент США 8 637 294 B2 (2014 г.).

    62. Momeni M.H., et al., Экспрессия, кристаллическая структура и целлюлазная активность термостабильной целлобиогидролазы Cel7A из гриба Humicola grisea var. термоидея. Акта Кристаллогр. Д биол. Кристаллогр. 70, 2356–2366 (2014). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    63. Ståhlberg J., et al., Исследования активности и кристаллической структуры каталитически дефицитных мутантов целлобиогидролазы I из Trichoderma reesei . Дж. Мол. биол. 264, 337–349 (1996). [PubMed] [Google Scholar]

    64. Goedegebuur F., et al., Улучшение термостабильности целлобиогидролазы Cel7A из Hypocrea jecorina путем направленной эволюции. Дж. Биол. хим. 292, 17418–17430 (2017). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    65. Momeni M.H., Ubhayasekera W., Sandgren M., Ståhlberg J., Hansson H., Структурное понимание ингибирования целлобиогидролазы Cel7A ксилоолигосахаридами. ФЕБС Дж. 282, 2167–2177 (2015). [PubMed] [Академия Google]

    66. Таунс Дж. и др., XSEDE: Ускорение научных открытий. вычисл. науч. англ. 16, 62–74 (2014). [Google Scholar]

    67. Аморе А. и др. Различная роль N — и O -гликанов в активности и стабильности целлюлазы. проц. Натл. акад. науч. США. 114, 13667–13672 (2017). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

    Грейферы-раскладушки — BLUG

    Грейферы-раскладушки — BLUG

    Откройте для себя полный ассортимент грейферных грейферов, которые мы предлагаем в зависимости от механизма привода и плотности, с которыми вам необходимо работать: сыпучие материалы и продукты, удобрения, шлам, навоз, песок, щебень, камни, шелуха, цемент, горячий клинкер…

    Грейфер грейферный электрогидравлический

    Грейфер грейферный электрогидравлический состоит из: электродвигателя, насоса и электрогидравлических клапанов, обеспечивающих давление в системе и корпусе грейфера, являющихся всеми элементами, собранными в корпусе машины.

    • С2-1,1

      Свайный и сыпучий материал плотностью до 1,1 т/м³.

    • С2-1,8

      Свайный и сыпучий материал плотностью до 1,8 т/м³.

    • С2-2,8

      Свайный и сыпучий материал плотностью до 2,8 т/м³.

    • С2Н-1,1

      Свайный и сыпучий материал плотностью до 1,1 т/м³.

    • С2Н-1,8

      Свайный и сыпучий материал плотностью до 1,8 т/м³.

    • С2Н-2,8

      Свайный и сыпучий материал плотностью до 2,8 т/м³.

    • С4-1,1

      Свайный и сыпучий материал плотностью до 1,1 т/м³.

    • С4-1,8

      Цемент, горячий клинкер (300°С) и свайный и сыпучий материал плотностью до 1,8 т/м³.

    • С4-2,8

      Свайный и сыпучий материал плотностью до 2,8 т/м³.

    • ЦВ2-1,1

      Свайный и сыпучий материал плотностью до 1,1 т/м³.

    • ЦВ2-1,8

      Свайный и сыпучий материал плотностью до 1,8 т/м³.

    • ЦВ2-2,8

      Свайный и сыпучий материал плотностью до 2,8 т/м³.


    Механические грейферные грейферы

    Грейферные грейферы, приводимые в действие и подвешенные на тросах. Существуют три весы: одноканатные, двухканатные и четырехканатные грейферы.

    • СМ4-0,8

      Удобрения, наваленные и сыпучие материалы плотностью до 0,8 т/м³.

    • СМ4-1,1

      Удобрения, злаки, уголь, свалки и сыпучие материалы плотностью до 1,1 т/м³.

    • СМ1-1,8

      Удобрения, крупы, уголь, цемент, клинкер, свайные и сыпучие материалы плотностью до 1,8 т/м³.

    • СМ4-2,8

      Полезные ископаемые, насыпные и сыпучие материалы плотностью до 2,8 т/м³.

    • СМ4-3,2

      Полезные ископаемые, наваленные и сыпучие материалы плотностью до 3,2 т/м³.

    • CM4G-0,8

      Удобрения, наваленные и сыпучие материалы плотностью до 0,8 т/м³.

    • CM4G-1,1

      Удобрения, злаки, уголь, свалки и сыпучие материалы плотностью до 1,1 т/м³.

    • СМ1R-1,8

      Цемент, клинкер, бокситы, полевошпатовые, свайные и сыпучие материалы плотностью до 1,8 т/м³.

    • СМ2-1,8

      Цемент, клинкер, свайный и сыпучий материал плотностью до 1,8 т/м³.

    • СМ4-1,8

      Цемент, клинкер, свайный и сыпучий материал плотностью до 1,8 т/м³.


    Грейферы гидравлические

    Грейферы неавтономные. Приводится в движение гидравлически группой посторонних грейферов. Масло под давлением должно поступать извне.

    • ЦНАХ-2,8

      Камни, гравий, песок, ил, подводные отходы в дренажных выработках, свайный и сыпучий материал плотностью до 2,8 т/м³.


    Экологически чистые захваты

    • Пример открытого клапана: Падение материала при транспортировке грейфером

    • Пример закрытого клапана: экологически чистый захват

    • Экологически безопасные модели исключают любой риск падения материала во время транспортировки.
    • Двойное эластичное закрытие между кромками клапанов для материалов в порошке .

    Проектирование и моделирование

    • Наше конструкторское бюро разрабатывает каждую конструкцию в соответствии с F.E.M. 1001 Раздел I:1998, UNE-58132 и UNE-EN 13155 с использованием новейших инструментов 3D и CAD/CAM.
    • Каждая новая конструкция проверяется и оптимизируется с использованием метода анализа конечных элементов для анализа эффектов усталости и гарантии 2 000 000 циклов на срок службы компонентов и машин.

    Работа электрогидравлической системы

    Реверс двигателя Клапан с электроприводом
    Количество проводов: 4 Количество проводов: 7
    Тип насоса: Поршневой насос (фиксированный расход) Тип насоса:
    Шестеренчатый насос (постоянный поток)
    Поршневой насос (постоянный поток)
    Поршневой насос (переменный поток)

    Гидравлические агрегаты с переменным расходом

    • Гидравлические агрегаты с электрическим клапаном, использующие 9Поршневые насосы с переменным расходом 1678 гарантируют увеличение срока службы гидравлических компонентов более чем на 300% по сравнению с насосом с постоянным расходом.
    • Эта система предотвращает перегрев масла (в 4 раза меньше, чем в насосах с фиксированным расходом) благодаря управлению Load-Sensing. Таким образом, плита насоса постоянно адаптирует свой наклон таким образом, чтобы оптимизировать усилие проникновения и минимизировать потребляемую мощность (на 40% меньше, чем у насосов с фиксированным потоком) , а также повысить общую эффективность грейфера.

    Материалы

    • Конструкция изготовлена ​​из катаной стали S355 J2G3 (упругий предел текучести 510-610 Н/мм2).
    • Возможна установка сменных марганцевых износостойких зубьев (до 500 HB) в грейферные клапаны таким образом, чтобы улучшить проникновение машины в материал.
    • Для захватов, контактирующих с абразивными материалами мы обычно рекомендуем изготавливать пластины клапанов из износостойкая сталь (твердость до 475 HBW).

    Сертификация Atex

    Возможность сертификации любой из наших моделей в зоне ATEX 1/21 или 2/22 для взрывоопасных сред.

    Свяжитесь с нами

    Файлы cookie на этом веб-сайте используются для персонализации контента и рекламы, предоставления функций социальных сетей и анализа трафика.

    Настроить файлы cookie Принять файлы cookie

    Лучших грейферных термопрессов [25 машин + обзоры]

    Сортировать по: РекомендуемыеЛучшие продажиПо алфавиту: A-ZПо алфавиту: Z-AЦена: от низкой до высокойЦена: от высокой до низкойДата: от новой до старойДата: от старой к новой

    В термопрессах с грейферным корпусом используется механизм с верхней и нижней пластинами, которые напоминают раковину моллюска или челюсти. Они обычно дешевле, прочнее и занимают меньше места. Они бывают всех размеров от меньше чем 15×15 до 20×25 дюймов. Когда вы нажимаете на одежду, верхняя плита опускается с помощью шарнирного механизма. Альтернативой раскладной конструкции является откидной термопресс. Они требуют больше места, но более безопасны и просты в эксплуатации.

    + Быстрый магазин

    Rincons 15 x 15 дюймов Машина для термопрессования раскладушки AP4-15LCD Распроданный $399,00

    Rincons 15 x 15 дюймов AP4-15LCD, грейферная машина для термопрессования

    Распроданный $399,00


    Этот коммерческий термопресс 15×15 имеет большой элемент 15″ x 15″ (фактический размер 38см x 38см), который позволяет вам создавать футболки, номерные знаки и многие другие уникальные. ..

    Посмотреть полную информацию о продукте »

    + Быстрый магазин

    Ricoma iKonix Flat 15″ x 15″ грейферная машина HP-3838H с термопрессом $389,00 $429.00

    Ricoma iKonix Flat 15″ x 15″ грейферный термопресс HP-3838H

    $389,00 429,00 долларов США


    Тепловой пресс iKonix 15 x 15 дюймов идеально подходит для переноса больших объемов футболок. Этот раскладной термопресс лучше всего подходит для начинающих, которым нужна надежная термопресс-машина. …

    Посмотреть полную информацию о продукте »

    + Быстрый магазин

    Rincons 16 x 20 дюймов Машина для переноса термопресса раскладушки AP-V20 портретной ориентации Продано

    Rincons 16 дюймов x 20 дюймов AP-V20, портретная термопресс-трансферная машина

    Распроданный


    Поверхность нагрева с антипригарным покрытием. Возможность загрузки под высоким давлением. Цифровой дисплей таймер и датчик температуры. Конструкция стальной рамы, очень толстые соединения и стержни компонентов конструкции. Легкое и широкое открывание. 16…

    Посмотреть полную информацию о продукте »

    + Быстрый магазин

    Rincons 16 x 20 дюймов Машина для переноса термопресса раскладушки AP4-20 Продано

    Rincons 16 x 20 дюймов грейферный термопресс AP4-20

    Распроданный


    Этот коммерческий термопресс имеет большой элемент 16″ x 20″ (фактический размер 15-3/4″ x 19″). -3/4″), что позволяет создавать собственные футболки, номерные знаки и многие другие уникальные и…

    Посмотреть полную информацию о продукте »


    + Быстрый магазин

    Ricoma iKonix Flat 16″ x 24″ грейферная машина HP-6040H с термопрессом Распроданный $479,00

    Ricoma iKonix Flat 16″ x 24″ грейферный термопресс HP-6040H

    Распроданный 479,00 долларов США


    Тепловой пресс iKonix 16 x 24 дюйма идеально подходит для переноса больших объемов футболок. Раскладные термопрессы лучше всего подходят для дизайнеров одежды, которым нужна надежная машина. Функции:…

    Посмотреть полную информацию о продукте »

    + Быстрый магазин

    Rincons 16 x 24 дюйма Ландшафтная раскладушка AP2-24 Машина для термопрессования Распроданный $729,00

    Rincons 16″ x 24″ Пейзажная раскладушка AP2-24 Машина для термопрессования

    Распроданный 729,00 долларов США


    Это горизонтальный термопресс размером 16×24 дюйма. Каркас из прочной стали весом 130 фунтов. Рама рукоятки длиннее, чтобы обеспечить больший рычаг и крутящий момент при минимальных усилиях. Этот…

    Посмотреть полную информацию о продукте »

    + Быстрый магазин

    HIX 15 x 15 дюймов Clamshell HT-400E Машина для термопрессования $901,25

    HIX 15 x 15 дюймов грейферный термопресс HT-400E

    $901,25


    Термопресс-трансфер Clamshell HT-400E — один из самых экономичных, удобных и простых в эксплуатации термопрессов HIX. Он идеально подходит для опытных мастеров и начинающих графических бизнесменов, а также…

    Посмотреть полную информацию о продукте »

    + Быстрый магазин

    Geo Knight 14 x 16 дюймов Clamshell DK16 Машина для термопрессования Распроданный 1200,00 долларов США

    Geo Knight 14 x 16 дюймов грейферный термопресс DK16

    Распроданный 1200,00 долларов США


    DK16 размером 14 x 16 дюймов открывается для полного доступа к нижнему нижнему столу. Задняя часть нагревательной плиты поднимается над нижним столом и удаляется от него, обеспечивая лучший доступ…

    Посмотреть полную информацию о продукте »


    + Быстрый магазин

    Geo Knight 14 дюймов x 16 дюймов Автоматическая машина для переноса термопресса DK16A Clamshell Продано

    Geo Knight 14 x 16 дюймов Автоматический грейферный термопресс DK16A

    Распроданный


    DK16A — это AUTO-RELEASE «Pop-Up» версия нашей ручной раскладушки среднего размера. Благодаря этой удивительной высокотехнологичной функции ваша раскладушка Digital Knight работает как полуавтоматический пресс с пневматическим приводом, без…

    Посмотреть полную информацию о продукте »

    + Быстрый магазин

    Geo Knight 16 x 20 дюймов Clamshell DK20 Машина для термопрессования Продано

    Geo Knight 16 x 20 дюймов грейферный термопресс DK20

    Распроданный


    Наша самая большая раскладушка DK20 16×20 открывается для полного доступа к нижнему нижнему столу. Важно отметить, что задняя часть нагревательной плиты поднимается выше и…

    Посмотреть полную информацию о продукте »

    + Быстрый магазин

    HIX 15 x 15 дюймов Машина для термопрессования грейферного типа HT-400 1475,00 долларов США

    HIX 15 x 15 дюймов, грейферный термопресс HT-400

    1475,00 долларов США


    Графическая индустрия называет эту машину «Рабочей лошадкой» по уважительной причине — грейферный печатный станок HIX HT-400 прочный, долговечный и создан для работы. Необходимая вещь для любого серьезного стартапа…

    Посмотреть полную информацию о продукте »

    + Быстрый магазин

    Geo Knight 16 дюймов x 20 дюймов Автоматическая выдвижная раскладушка DK20A Машина для термопрессования Продано

    Geo Knight 16 x 20 дюймов Автоматическая выдвижная грейферная машина DK20A Термопресс для трансфера

    Распроданный


    DK20A — это AUTO-RELEASE «Pop-Up» версия нашей самой большой ручной раскладушки. Благодаря этой удивительной высокотехнологичной функции ваша раскладушка Digital Knight работает как полуавтоматический пресс с пневматическим приводом, без…

    Посмотреть полную информацию о продукте »


    + Быстрый магазин

    HIX 16 x 20 дюймов HT-600 Машина для переноса тепла с грейферным корпусом $1675,00

    HIX 16 x 20 дюймов, грейферный термопресс HT-600

    1675,00 долларов США


    Пресс HIX HT-600 Clamshell Press гарантирует, что ваши большие оттиски с термопереносом будут идеальными от края до края. Благодаря большей поверхности плиты размером 16 x 20 дюймов вы сможете…

    Посмотреть полную информацию о продукте »

    + Быстрый магазин

    HIX 15 x 15 дюймов Термопресс-трансферная машина S-450 с автоматически открывающейся грейферной оболочкой $1795,00

    HIX 15 x 15 дюймов Термопресс для переноса грейферного корпуса S-450 с автоматическим открытием

    1795,00 долларов США


    Закройте крышку и уходите. Найди другую работу или возьми газировку. С теплообменной машиной HIX S-450 с автоматическим выпуском у вас будет беспроблемная работа. Когда…

    Посмотреть полную информацию о продукте »

    + Быстрый магазин

    Insta 15 x 20 дюймов, модель 158, плоский грейферный термопресс с автоматическим выпуском 1830,00 долларов США

    Плоский грейферный термопресс Insta 15 x 20 дюймов, модель 158, с автоматическим выпуском

    1830,00 долларов США


    Термопресс Insta Model 158 Digital Auto Release предлагает одно из основных преимуществ автоматической машины — функцию автоматического открытия — в легком, недорогом, эргономичном дизайне. ..

    Посмотреть полную информацию о продукте »

    + Быстрый магазин

    HIX 16 x 20 дюймов S-650 Автоматически открывающаяся грейферная машина для термопереноса 1 995,00 долларов США

    HIX 16 x 20 дюймов S-650 Термопресс для автоматического открывания грейферного пресса

    1995,00 долларов США


    Получите покрытие, необходимое для ваших проектов, с автоматически открывающимся грейферным термопрессом HIX S-650. Этот выдающийся пресс открывается автоматически без использования воздушного компрессора. Это идеальный пресс…

    Посмотреть полную информацию о продукте »


    + Быстрый магазин

    Geo Knight 14 x 16 дюймов Многоцелевой термопресс DC16AP Продано

    Многоцелевой термопресс Geo Knight 14 x 16 дюймов DC16AP

    Распроданный


    Geo Knight DC16AP — это пневматический автоматический многоцелевой откидной термопресс размером 14 x 16 дюймов с дополнительными сменными нагревательными плитами и столами. Плавное автоматическое нажатие и активация кнопки обеспечивают…

    Посмотреть полную информацию о продукте »

    + Быстрый магазин

    HIX 15 x 15 дюймов Пневматическая грейферная машина N-680 с термопрессом 2835,00 долларов США

    HIX 15 x 15 дюймов Пневматический грейферный термопресс N-680

    2835,00 долларов США


    Пневматические автоматические термопрессы HIX N-680 можно описать тремя фразами: простота использования, высокая эффективность и надежность. Вы заметите, что ваши операторы будут меньше уставать и…

    Посмотреть полную информацию о продукте »

    + Быстрый магазин

    HIX 16 x 20 дюймов Пневматическая грейферная машина N-880 с термопрессом 3 655,00 долларов США

    HIX 16 x 20 дюймов Пневматический грейферный термопресс N-880

    3655,00 долларов США


    Автоматический термопресс HIX N-880 с пневматическим приводом предоставляет ряд возможностей, на которые вы можете положиться. Благодаря эффективности, согласованности и надежной производительности у вас будет…

    Посмотреть полную информацию о продукте »

    Бытие: поиски происхождения | Подсистемы космического корабля — капсула возврата образца | Лаборатория реактивного движения

     

     

      Возвратная капсула для проб

    Капсула для возврата проб представляет собой тупой конус с диаметр 152 сантиметра (60 дюймов). Он имеет пять основные компоненты: теплозащитный экран, корпус, возврат образца канистра, парашютная система и авионика.

    Общая масса капсулы, включая парашют системы, составляет 205 кг (420 фунтов).

    Шарнирный раскладной механизм открывает и закрывает капсулу. Научная канистра с коллектором солнечного ветра массивы и концентратор ионов помещается внутри, с центральным вращающийся механизм для расширения массивов коллекторов. Капсула заключена в материал, пропитанный углеродом. известный как углерод-углерод и абляционный материал, называемый SLA-561 для защиты образцов, хранящихся внутри от тепла повторного входа. Парашют, активированный минометная часть перевозится внутри капсулы и будет используется для замедления его спуска.

    Теплозащитный экран Genesis

    Теплозащитный экран выполнен из графито-эпоксидного композита покрыты системой термозащиты. Самый дальний теплозащитный слой выполнен из карбона. теплозащитный экран капсулы остается прикрепленным к капсуле на всем протяжении спуска и служит защитным кожухом для канистр с образцами при приземлении. Теплозащитный экран предназначен для удаления более 99 процентов от первоначального кинетическая энергия возвратной капсулы образца.

    Генезис Корпус

    Корпус корпуса также изготовлен из графито-эпоксидной смолы. композит, покрытый системой термозащиты: материал на основе пробки под названием SLA-561V, который был разработан Lockheed Martin для использования в миссиях Viking на Марс, и использовались в нескольких миссиях, включая Genesis, Миссии Pathfinder, Stardust и Mars Exploration Rover. Защитная оболочка обеспечивает точки крепления парашюта. системы и защищает капсулу от воздействия рециркуляции поток тепла вокруг капсулы.

    Контейнер для научных исследований представляет собой алюминиевый корпус, содержащий специализированные коллекторные решетки и концентратор ионов. На внутренней стороне крышки научной канистры находится объемный массив солнечных ветровых коллекторов. Специализированный коллекционер массивы вращаются внутри канистры науки. Под сложенными массивами коллекторов находится концентратор ионов. образует дно научной канистры. Канистра находится внутри возвратной капсулы пробы, которая установлена к палубе оборудования, подвешенной между корпусом и тепловой экран на наборе опорных стоек.

    Парашютная система состоит из минометного развертывания Тормозной желоб длиной 2,1 метра (6,8 фута) для обеспечения устойчивости на сверхзвуковых скоростях, и главный парашют 10,5 на 3,1 метра (около 34,6 на 12,1 фута).

    Внутри канистры газовый баллончик будет давить минометную трубу и вытолкнуть тормозной парашют. тормоз парашют будет развернут на высоте примерно 33 км (108 000 футов) для обеспечения устойчивости капсулу, пока не освободится главный парашют. Переключатель гравитации датчик и таймер инициируют освобождение тормоза парашют. На основе информации от таймера и резервного давления датчики, небольшое пиротехническое устройство перережет тормозной парашют из капсулы на расстоянии около 6,7 км.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.